【生物一现代生物科技专题】科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄理科的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有Pst I 、sma II 、Hind III 、Alul 等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr 为抗氨苄青霉素基因），其中①——④ 是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，I 、II 表示相关结构或细胞。请据图作答：

（l）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶，分别对       进行切割，切割后产生的DNA 片段分别为       种。

（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体I 中含有         作为标记基因。

（3）研究人员通常采用        法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用       技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的              过程。

【生物一现代生物科技专题】

国家863计划项目“利用崂山奶山羊乳腺生物反应器制备药用蛋白”取得重大进展。目前，已经成功获得经纯化的抗凝血酶III蛋白，达到国际先进水平。下面是制作崂山奶山羊乳腺生物反应器的流程图：

   （1）根据流程图分析，动物乳腺生物反应器主要利用了_____技术、胚胎工程技术和细胞培养技术。

   （2）要实现①超数排卵，应在崂山奶山羊A发情周期的某一阶段用______处理，然后在恰当时期进行        收集卵子。通过②采集的精子不能直接使成熟的卵子受精，原因是____________________________________________________________

   （3）过程④需将抗凝血酶III基因注入受精卵的雄原核内，在显微镜下判断是否完成受精作用的标志是________________________。

   （4）要使人的抗凝血酶III基因在山羊乳腺细胞中特异性表达，完整的基因表达载体要包括目的基因、__________、标记基因等部分。在⑤之前要检测早期胚胎细胞是否已经导人抗凝血酶III基因，宜采用_________________技术

   （5）若要一次获得多只完全相同的转基因崂山奶山羊D，⑤应采用_____________技术。

【生物一现代生物科技专题】

我们日常吃的大米中铁含量极低，科研人员通过基因工程等技术，培育出了铁含量比普通大米高60％的转基因水稻，改良了稻米的营养品质。下图为培育转基因水稻过程示意图，请回答：

(1)在上述工程中，铁结合蛋白基因称为____________，获取该基因后常用___________技术进行扩增。

(2)构建重组Ti质粒时，通常要用同种限制酶分别切割___________和__________。将重组Ti质粒转入农杆菌时，可以用___________处理农杆菌，使重组Ti质粒易于导入。

(3)将含有重组Ti质粒的农杆菌与水稻愈伤组织共同培养时，通过培养基2的筛选培养，可以获得__________；培养基3与培养基2的区别是_________。

(4)检测培育转基因水稻的目的是否达到，需要检测转基因水稻____________。

35.   【生物一现代生物科技专题】（8分）

科学家发现人的第5号染色体中的PITXl基因能遏制端粒酶发挥作用，将该基因移植到实验鼠的癌细胞中，能使得癌细胞无法增殖。请分析回答问题：

(1)在上述转基因过程中用到的工具有______，PITXI基因称为______。

(2)将该基因移植到实验鼠的癌细胞的过程中，其操作的核心步骤为______,标记基因的作用是______。

(3)在配制动物细胞培养液时，通常加入______等天然成分，在培养癌细胞的过程中，______ (会、不会）出现接触抑制。

(4)用鼠的骨髓瘤细胞与人的某种浆细胞融合，得到的杂交瘤细胞既能______，又能______。

35.  【生物一现代生物科技专题】（8分）

科学家发现人的第5号染色体中的PITXl基因能遏制端粒酶发挥作用，将该基因移植到实验鼠的癌细胞中，能使得癌细胞无法增殖。请分析回答问题：

(1)在上述转基因过程中用到的工具有______，PITXI基因称为______。

(2)将该基因移植到实验鼠的癌细胞的过程中，其操作的核心步骤为______,标记基因的作用是______。

(3)在配制动物细胞培养液时，通常加入______等天然成分，在培养癌细胞的过程中，______ (会、不会）出现接触抑制。

(4)用鼠的骨髓瘤细胞与人的某种浆细胞融合，得到的杂交瘤细胞既能______，又能______。