回答下列有关基因工程和克隆技术的问题。（10分）

2006年12月22日，我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

63、说出绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程中用到了哪些生物工程技术？           　

利用了哪些原理？                      （本题答案从下列所给选项中选择填写）

①转基因技术；②细胞核移植技术；③胚胎移植技术；④干细胞技术；⑤动物细胞培养技术

⑥基因突变；⑦基因重组；⑧动物细胞核具有全能性；⑨动物细胞具有全能性

64、过程①②中必需用到的酶分别是                和                 。绿色荧光蛋白基因之所以能与质粒重组，原因是                                               。

65、早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及               等物质。

通过上图中过程①的方法获取目的基因的数量是有限的，要获得大量的绿色荧光蛋白基因可以利用PCR技术。PCR扩增反应（如下图所示）中加入的TaqDNA聚合酶能在接近沸点的条件下，发挥延伸DNA子链的作用，将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上。请回答：

PCR（DNA聚合酶链式反应）技术示意图：

66、你认为TaqDNA聚合酶一定是从下列哪种生物体细胞中分离提取的？        

A．水母细胞         B．猪胎儿成纤维细胞   　C．极端嗜热菌     D．大肠杆菌

67、下面的表达式不能反映TaqDNA聚合酶的功能，为什么？                           。

68、用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点和标出碱基对数。（2分）

 请回答下列有关问题：

（1）下面图Ⅰ表示胰岛素与胰高血糖素在调节葡萄糖代谢中的相互关系，当血糖浓度降低时，激素①分泌量增加并通过生理过程f影响②的分泌。图Ⅱ为碳在无机环境、植物、动物体内的变化情况。a、b、c、d、e表示不同的生理作用过程，X表示某物质。

1） 图Ⅱ中，a、b、c表示的生理作用过程依次是____________________________；生理过程f是________作用；在激素①②中，能调节生理作用过程e的是激素_________________。

2）激素②的分泌受多种因素的影响，除了血糖直接影响外，还有__________________________________________三方面的调节。

3）假设在一定时间内，动物体呼吸作用产生的CO₂与吸进的O₂的体积比为M。对同一动物来说，短时剧烈运动后与平静状态时(设氧化分解利用的都是葡萄糖)比，M值的变化为______________ (变大/变小/不变)。

（2）研究表明，低浓度的生长素促进细胞的伸长，但生长素浓度增高到一定值时，就会促进细胞中乙烯的合成，而乙烯含量的增高，反过来又抑制了生长素对细胞伸长的促进作用。现利用黄花豌豆幼苗切段为实验材料，请设计实验验证乙烯对生长素促进细胞伸长的抑制作用。

实验器材：黄花豌豆幼苗若于、剪刀、刻度尺、培养皿、烧杯、5种一定浓度梯度的生长素溶液(其中含最适浓度)、一定浓度梯度的乙烯、清水、滤纸等。

实验步骤：

①取生长状况相同的豌豆幼苗，____________________________________________；

②取标号为A、B、C、D、E的五只培养皿，分别加入相同的培养液和不同浓度的生长素溶液，将五组豌豆茎切段放入培养皿内，置于相同条件下培养

③_______________________________________________________________________

④再取生长状况相同的豌豆幼苗，从豌豆幼苗的同一部位切取等长的茎段若干段，平均分成五组

⑤取标号为a、b、c、d、e五只培养皿，分别加入____________________________，将豌豆茎切段分组放入培养皿内，将各组装置分别置于_____________________环境中，并在与步骤②相同的条件下培养；3天后，测量茎切段长度，计算每组茎切段长度的平均值。

实验结果：将实验结果绘制成下图曲线。

Ⅰ.下图A、B、C分别表示某雌雄异株植物M的花色遗传、花瓣中色素的控制过程及性染色体简图。植物M的花色（白色、蓝色和紫色）由常染色体上两对独立遗传的等位基因（A和a，B和b）控制，叶型（宽叶和窄叶）由另一对等位基因（D和d）控制，据图回答问题：

（1）据图A分析，植物M花色的遗传 ________（填“是”或“否”符合孟德尔遗传规律。）

（2）结合A、B两图可判断A图中甲、乙两植株的基因型分别为_________________。

如果让图A中的F₂蓝花植株自交，后代表现型及比例为__________________。

（3）除图B中体现的基因控制生物性状的方式外，基因控制性状的另外一种方式是__________________________________________________________________________。

（4）在植物M种群中，以AaBb和aaBb两种基因型的植株做亲本，杂交后产生的子一代的表现型及比例为________________________________________________________。

（5）植物M的XY染色体既有同源部分（图C中的I片段），又有非同源部分（图C中的II、III片段）。若控制叶型的基因位于图C中I片段，宽叶（D）对窄叶（d）为显性，现有纯种的宽叶、窄叶雌性植株若干和基因型为X^DY^D、X^DY^d、X^dY^D的宽叶雄株若干，通过一代杂交，培育出可依据叶型区分雌雄的大批幼苗，则亲本的杂交组合有____________（填基因型）。

Ⅱ. 下面是转基因小鼠的培育过程，请回答相关的问题。

（1）获取外源基因常用的工具酶是         ，采用         技术可在短时间内获得大量的某种外源基因，并且至少需要在第       轮循环产物中，才开始出现两种引物之间的序列。

（2）在供体母鼠发情周期的某一阶段，用           激素处理可促使其超数排卵。使代孕母鼠与供体母鼠的生理条件达到同步或者一致的过程，称为           处理。

（3）将基因表达载体导入受精卵常用的方法是          。早期胚胎的体外培养，培养液中除了含有各种无机盐、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还要添加激素和              。当早期胚胎培养至桑椹胚或        ，才能进行胚胎移植。

（4）待代孕母鼠产出幼仔后，取幼鼠尾巴细胞提取基因组DNA，可用       法分析以确定是否为转基因鼠。

29.     （16分）

为研究IAA（生长素）和GA（赤霉素）对植物茎伸长生长的作用，用豌豆做了一系列实验，请分析回答：

⑴ 分别使用不同浓度的TIBA（IAA抑制剂）和S-3307（GA抑制剂）处理豌豆黄化苗茎切段，测量结果如下：

   ①实验中________是对照组。

   ②图1中，浓度高（80和160 mg · L^-1）的TIBA对茎切段的伸长生长________作用；中等浓度（40 mg · L^-1）的TIBA对茎切段的伸长生长________作用；浓度低（10和20 mg · L^-1）的TIBA对茎切段的伸长生长________作用，这可能与TIBA本身有微弱的________（作用）有关。

   ③图1、图2两组实验均出现茎切段的伸长生长受抑制现象，表明IAA和GA________。

⑵ 植物体内的GA有GA₁、GA₂……等多种，已知GA₁是由GA₂₀转化而来的，转化过程如下：

有人发现，豌豆去顶后，茎杆中IAA的浓度________，无活性的GA₂₀向有活性的GA_l的转化也减少；由此推测IAA在________激素合成中起作用。

⑶ 为验证上述推测正确与否，做了如下实验：

将豌豆的茎切段浸入含有¹⁴C的GA₂₀的培养液中，施加适宜浓度的IAA或不施加IAA，后者茎切段的代谢产物主要是含有¹⁴C的无活性GA₂₉，而前者茎切段中则是含有¹⁴C的有活性GA₁。

①他们采用了________技术追踪GA₂₀的转化途径。

②结果表明生长素具有________作用，其作用机理可能是生长素最终促进________酶基因的表达。