为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进一步降解，分析片段大小。下列是某小组进行的相关实验。

已知一线性DNA序列共有5 000bp（bp为碱基对）	第一步水解	产物（单位：bp）	第二步水解	产物（单位：bp）
	A酶切割	3 100	第一步水解产物分离后，分别用B酶切割	1 900　200
		1 400		800　600
		1 000		1 000
		500		500
	B酶切割	2 500	将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割	1 900　600
		1 300		800　500
		1 200		1 000　200
	经A酶和B酶同时切割	1 900　1 000　800　600　500　200

⑴该实验设计主要体现了____________________原则。

⑵由实验可知，在这段已知序列DNA分子上，A酶和B酶的识别位点分别为____________________个和____________________个。

⑶根据表中数据，请在下图中标出相应限制性酶的酶切位点。

　　　　　

⑷已知BamH 与BglⅡ的识别序列及切割位点如右图所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，

	—AGATCC— —TCTAGG—

若干循环后 ____________________和____________________序列明显增多，该过程中DNA连接酶催化____________________键的形成。

⑸一个基因表达载体的组成除了目的基因外，还必须有_________、___________及标记基因。