基因工程相关。2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

注：图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—^↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。

  （1）在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来        ，理由是：                                          。

  （2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是              。

  （3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是               。获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是，可以避免           。

  （4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：          （用数字表示）。①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。

 

大肠杆菌是基因工程常用的受体菌。它既可生活在人和动物肠道内，又可随粪便排出污染环境，因而常用作饮水和食物（或药物）的卫生学标准（国家规定，每升饮用水中大肠杆菌数不应超过3个）。请回答下列与大肠杆菌有关的问题：
（1）从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于________；从生存环境分析推测，它的新陈代谢类型应该是________。
（2）某研究性学习小组对本校自来水进行了检测。一同学用无菌吸管吸取1 mL水样至盛有________ mL无菌水的试管中，得到10¹倍稀释的样品；依次稀释，得到10²、10³倍稀释的样品；把每种稀释度的样品分别接种到3个平板培养基上培养，最后统计菌落数。若3种稀释度的平均菌落数分别为402、30、2，应以_______倍稀释的样品来计算水样中的菌体数；若接种量均为0.1 mL，则该水样中大肠杆菌超标_______万倍。
（3）下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL。根据用途划分该培养基属于________(选择/鉴别)培养基。该培养基中的碳源是________。
（4）培养大肠杆菌时，常用的接种方法是平板划线法和______________。为防止杂菌污染需要对培养基和培养皿进行____________。
（5）以下微生物发酵生产特定产物时，所利用主要微生物的细胞结构与大肠杆菌相同的是________(双选)。
A．制作果酒      B．由果酒制作果醋      C．制作泡菜     D．制作腐乳
（6）利用培养基不仅可以分离培养微生物，也可以进行植物组织培养。与微生物培养明显不同的是，用于组织培养的培养基中还需要加入________。

大肠杆菌是基因工程常用的受体菌。它既可生活在人和动物肠道内，又可随粪便排出污染环境，因而常用作饮水和食物（或药物）的卫生学标准（国家规定，每升饮用水中大肠杆菌数不应超过3个）。请回答下列与大肠杆菌有关的问题：

（1）从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于________；从生存环境分析推测，它的新陈代谢类型应该是________。

（2）某研究性学习小组对本校自来水进行了检测。一同学用无菌吸管吸取1 mL水样至盛有________ mL无菌水的试管中，得到10¹倍稀释的样品；依次稀释，得到10²、10³倍稀释的样品；把每种稀释度的样品分别接种到3个平板培养基上培养，最后统计菌落数。若3种稀释度的平均菌落数分别为402、30、2，应以_______倍稀释的样品来计算水样中的菌体数；若接种量均为0.1 mL，则该水样中大肠杆菌超标_______万倍。

（3）下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。

成分	蛋白胨	乳糖	蔗糖	K2HPO4P	显色剂	琼脂
含量	10.0 g	5.0 g	5.0 g	2.0 g	0.2 g	12.0 g

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL。根据用途划分该培养基属于________(选择/鉴别)培养基。该培养基中的碳源是________。

（4）培养大肠杆菌时，常用的接种方法是平板划线法和______________。为防止杂菌污染需要对培养基和培养皿进行____________。

（5）以下微生物发酵生产特定产物时，所利用主要微生物的细胞结构与大肠杆菌相同的是________(双选)。

A．制作果酒      B．由果酒制作果醋      C．制作泡菜      D．制作腐乳

（6）利用培养基不仅可以分离培养微生物，也可以进行植物组织培养。与微生物培养明显不同的是，用于组织培养的培养基中还需要加入________。

 

随着人类基因组计划的进展和多种生物基因组测序工作的完成，人类跨入了后基因组和蛋白质组时代。对蛋白质进行研究时，首先要获得纯度较高的蛋白质。下图是某生物兴趣小组在“蛋白质的提取和分离”实验中，准备从猪的血液中初步提取血红蛋白，设计的“血红蛋白提取、分离流程图”：

请回答下列有关问题：

(1)样品处理中红细胞的洗涤要用________反复冲洗、离心。向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH7.0的缓冲液并充分搅拌，可以破碎红细胞，破碎细胞的原理是________。

(2)血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是________，若要尽快达到理想的透析效果，可以________(写出一种方法)。

(3)电泳利用了待分离样品中各种分子的____________________________________等的差异，而产生不同迁移速度，实现各种分子的分离。

(4)一同学通过血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳，观察到正常人和镰刀型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如上图所示。由图可知携带者有________种血红蛋白，从分子遗传学的角度作出的解释是____________________________________________________________

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5．(14分)随着人类基因组计划的进展和多种生物基因组测序工作的完成，人类跨人了后基因组和蛋白质组时代。对蛋白质进行研究时，首先要获得纯度较高的蛋白质。下图是某生物兴趣小组在“蛋白质的提取和分离”实验中，准备从猪的血液中初步提取血红蛋白，设计的“血红蛋白提取、分离流程图”：请回答下列有关问题：

(1)样品处理中红细胞的洗涤要用__________反复冲洗、离心。向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH7.0的缓冲液并充分搅拌，可以破碎红细胞，破碎细胞的原理是_________________________________________

________________________________________________________________________。

(2)血红蛋白粗分离阶

段，透析的目的是__________，若要尽快达到理想的透析效果，可以__________(写出一种方法)。

(3)电泳利用了待分离样品中各种分子的______________________等的差异，而产生不同迁移速度，实现各种分子的分离。

(4)一同学通过血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳，观察到正常人和镰刀型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如上图所示。由图可知携带者有__________种血红蛋白，从分子遗传学的角度作出的解释是________________________________________________________________

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