我市某科研机构培育出一批兰花幼苗用于出口，据其技术人员介绍，这批兰花幼苗经得起严格的进出口检疫。培育这批兰花苗应用的技术是

1. A.
   利用兰花茎尖进行组织培养
2. B.
   利用兰花体细胞杂交技术
3. C.
   利用有性杂交技术
4. D.
   利用细胞核移植技术

Ⅰ.某班级组织全班学生利用暑假开展某种单基因遗传病（由基因B－b控制）的调查活动，具体调查结果见下列表格。请依据题意回答：

□ ○分别表示健康男女  ■●分别表示患病男女

（1）据图中调查结果分析，可推断此遗传病为       性遗传病，此致病基因位于      染色体上。

（2）第Ⅰ组家庭的子代性状分离比并不是3:1，是因为其父母基因组成为                         。

（3）通过调查与统计，此类遗传病的发病率在男性中发病率约为          %，在女性中发病率约

为            %。

（4）测序结果表明，此致病基因与正常基因相比，其模板链中某段的GCG突变为GAG，推测密码子发生的变化是                           。

（5）研究发现，致病基因表达的蛋白质与正常基因表达的蛋白质氨基酸数目完全相同，但空间结构发生改变。进一步研究发现，正常基因表达的蛋白质在细胞内能促进某种重要化合物的合成。据此推测，正常基因很可能是通过控制                                 从而控制人体性状的。

Ⅱ. 2013年4月16日国家卫生和计划生育委员会公布，全国共报告人感染H7N9禽流感确诊病例77例，其中16人已死亡，禽流感再度备受关注。医学界正在致力于研究预防H7N9禽流感病毒的疫苗和单克隆抗体。由于来源于小鼠体的单克隆抗体，治疗效果不很理想。科学家决定采用基因敲除术将小鼠的Ig 基因敲除，代之以人的 Ig 基因，然后用 H7N9 病毒去免疫小鼠，再经杂交瘤技术即可产生大量完全人源化抗体。下图是某科研机构的实验方案。请回答：

（1）此处基因敲除技术的受体细胞不是小鼠的受精卵，而是小鼠的          细胞，经技术处理后

的该细胞，再重新植入小鼠脾脏中增殖。

（2）小鼠B淋巴细胞用B表示，小鼠骨髓瘤细胞用A表示，在培养液中，用灭活的动物病毒作促融剂，

培养液中共有     种类型的融合细胞（只考虑两两融合）

（3）第一次筛选是选出          型的细胞（用字母组合表示），筛选具体方法是在培养基中加入某种物质，抑制骨髓瘤细胞DNA的复制，而B细胞DNA复制虽不受影响，但增殖能力很有限，只有杂交瘤细胞可以借助B细胞DNA复制的途径，继续增殖。此种培养基称为                 培养基。

（4）将能产生抗H7N9病毒的杂交瘤细胞在动物培养液中进行培养，其培养液与植物组织培养的MS培养基相比，特有成分是              。

（5）利用上述技术生产的单克隆抗体可制作成诊断盒，用于准确、快速诊断H7N9禽流感病毒的感染者，这种诊断运用了              杂交技术。

（6）有人设想，能否利用经H7N9病毒免疫后小鼠效应T细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，大量生产单克隆干扰素，用于H7N9禽流感患者的有效治疗。你觉得该方法          （可行/不可行），因为                               

降钙素是一种多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低，半衰期较短。某科研机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，将人工合成的降钙素DNA与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功的在大肠杆菌中得以表达。操作大体过程如下图1、图2，据图回答下列问题：   

（1）图1示人工合成降钙素DNA的过程。从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA。从功能看，Klenow酶是一种___________酶，合成的双链DNA有________个碱基对。
（2）图2将重组质粒导入大肠杆菌最常用的方法是用       处理，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。
（3）如果要通过基因工程获得转基因动物，将目的基因导入受体细胞最常用的方法是             。
（4）以下关于蛋白质工程的说法正确的是（  ）
A．蛋白质工程以基因工程为基础          
B．蛋白质工程就是酶工程的延伸
C．蛋白质工程就是用蛋白酶对蛋白质进行改造  
D．蛋白质工程只能生产天然的蛋白质

科学家利用基因工程技术成功地将人的胰岛素基因导入大肠杆菌体内，生产出入的胰岛素。在该过程中用质粒作为运载体，已知质粒上含有抗氨苄青霉素（简称氨苄）和抗四环素的基因（位于不同区段），目的基因与质粒的结合位点刚好位于抗氨苄青霉素基因结构内，且受体大肠杆菌体内不含质粒，也不含质粒上的抗药基因。导入完成后，实际上在得到的大肠杆菌中，有的根本没有导入质粒，有的导入的是普通质粒，只有少数导入的是重组质粒。

 某科研机构想从培养基上筛选出含重组质粒的大肠杆菌（即“目的菌种”），他们设计了如下实验方案：

第一步：将得到的大肠杆菌接种在含         的培养基上，筛选出含有质粒的大肠杆菌。

第二步：为选出“目的菌种”，将第一步筛选出的大肠杆菌用“影印法”分离。

(1)采用涂布平板法，将第一步筛选的大肠杆菌以合适的稀释度涂布到含        质粒的大肠杆菌和含    质粒的大肠杆菌都能生长的培养基上，经培养后形成单菌落，如图B所示。

(2)通过一消毒的“印章”（如图A所示），将培养基上的菌落分别按原位印到下图所示的非选择培养基        和选择培养基         上（顺序不能颠倒，C培养基成分与B相同，D上含有氨苄青霉素）。

(3)培养后对照观察C、D培养基上的单菌落。

(4)在C培养基上挑取D培养基上         的位置上的单菌落，从而获得含重组质粒的大肠杆菌，即“目的菌种”。

(5)实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理后才能倒掉，这样做的目的是                  。

（22分）

Ⅰ.（14分）某班级组织全班学生利用暑假开展某种单基因遗传病（由基因B－b控制）的调查活动，具体调查结果见下列表格。请依据题意回答：

分别表示健康男女  ■●分别表示患病男女

（1）据图中调查结果分析，可推断此遗传病为       性遗传病，此致病基因位于      染色体上。

（2）第Ⅰ组家庭的子代性状分离比并不是3:1，是因为其父母基因组成为                         。

（3）通过调查与统计，此类遗传病的发病率在男性中发病率约为          %，在女性中发病率约为            %。

（4）测序结果表明，此致病基因与正常基因相比，其模板链中某段的GCG突变为GAG，推测密码子发生的变化是                           。

（5）研究发现，致病基因表达的蛋白质与正常基因表达的蛋白质氨基酸数目完全相同，但空间结构发生改变。进一步研究发现，正常基因表达的蛋白质在细胞内能促进某种重要化合物的合成。据此推测，正常基因很可能是通过控制               　                    从而控制人体性状的。

Ⅱ.（8分）2013年4月16日国家卫生和计划生育委员会公布，全国共报告人感染H7N9禽流感确诊病例77例，其中16人已死亡，禽流感再度备受关注。医学界正在致力于研究预防H7N9禽流感病毒的疫苗和单克隆抗体。由于来源于小鼠体的单克隆抗体，治疗效果不很理想。科学家决定采用基因敲除术将小鼠的 Ig 基因敲除，代之以人的 Ig 基因，然后用 H7N9 病毒去免疫小鼠，再经杂交瘤技术即可产生大量完全人源化抗体。下图是某科研机构的实验方案。请回答：

（1）此处基因敲除技术的受体细胞不是小鼠的受精卵，而是小鼠的          细胞，经技术处理后的该细胞，再重新植入小鼠脾脏中增殖。

（2）小鼠B淋巴细胞用B表示，小鼠骨髓瘤细胞用A表示，在培养液中，用灭活的动物病毒作促融剂，培养液中共有     种类型的融合细胞（只考虑两两融合）

（3）第一次筛选是选出          型的细胞（用字母组合表示），筛选具体方法是在培养基中加入某种物质，抑制骨髓瘤细胞DNA的复制，而B细胞DNA复制虽不受影响，但增殖能力很有限，只有杂交瘤细胞可以借助B细胞DNA复制的途径，继续增殖。此种培养基称为                 培养基。

（4）将能产生抗H7N9病毒的杂交瘤细胞在动物培养液中进行培养，其培养液与植物组织培养的MS培养基相比，特有成分是              。

（5）利用上述技术生产的单克隆抗体可制作成诊断盒，用于准确、快速诊断H7N9禽流感病毒的感染者，这种诊断运用了              杂交技术。

（6）有人设想，能否利用经H7N9病毒免疫后小鼠效应T细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，大量生产单克隆干扰素，用于H7N9禽流感患者的有效治疗。你觉得该方法　

　　　　　　　　（可行/不可行），因为