33. PCR技术是将某一特定DNA片段在体外酶的作用下.在高温环境中复制出许许多多相同片段的一种方法.利用它能快速而特异地扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段.请回答, (1)PCR技术的原理是模拟生物体内 的过程. (2)PCR扩增过程中对DNA片段进行高温加热处理.其目的是 .其作用相当于细胞内 酶的作用. (3)在PCR扩增过程中.必需加一特定的DNA聚合酶.从以上材料中可判断.该酶与一般人体细胞中的DNA聚合酶相比.最主要的特点是 . (4)某样品DNA中共含3000个碱基对.碱基数量满足:=1/2.现欲得到100个与样品相同的DNA.至少需要向试管中加入 个腺嘌呤脱氧核苷酸. 【查看更多】

 

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PCR技术是将某一特定DNA片段在体外酶的作用下,复制出许许多多相同片段的一种方法,利用它能快速而特异地扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段。它的基本过程如下:
[注图中“▄”表示每次扩增过程中需要的引物(用P代表)。每个引物含20个脱氧核苷酸,并分别与DNA片段两端碱基互补,其作用是引导合成DNA子链]请据图分析回答:
(1)PCR技术的原理是模拟生物体内______________________的过程。
(2)PCR扩增过程中对DNA片段进行高温加热处理,其目的是_________,其作用相当于细胞内_________酶的作用.
(3)在③适温延伸过程中,必需加一特定的DNA聚合酶,从图示中可判断,该酶与一般人体细胞中的DNA聚合酶相比,最主要的特点是_________________________。
(4)假如引物都用3H标记,从理论上计算,DNA片段经3次扩增所得的8个DNA分子中,含有3H 标记的DNA分子占__________%。
(5)假定DNA片段含200对脱氧核苷酸,经3次扩增,从理论上计算,除需要引物14个外,还需要游离的脱氧核苷酸________________个。

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PCR技术是将某一特定DNA片段在体外酶的作用下,复制出许许多多相同片段的一种方法,利用它能快速而特异地扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段。它的基本过程如下:

[注图中“▄”表示每次扩增过程中需要的引物(用P代表)。每个引物含20个脱氧核苷酸,并分别与DNA片段两端碱基互补,其作用是引导合成DNA子链]请据图分析回答:

(1)PCR技术的原理是模拟生物体内__________________的过程。

(2)PCR扩增过程中对DNA片段进行高温加热处理,其目的是                     ,其作用相当于细胞内__________酶的作用.

(3)在③适温延伸过程中,必需加一特定的DNA聚合酶,从图示中可判断,该酶与一般人体细胞中的DNA聚合酶相比,最主要的特点是______________。

(4)假如引物都用3H标记,从理论上计算,DNA片段经3次扩增所得的8个DNA分子中,含有3H 标记的DNA分子占         %。

(5)假定DNA片段含200对脱氧核苷酸,经3次扩增,从理论上计算,除需要引物14个外,还需要游离的脱氧核苷酸           个。

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PCR技术是将某一特定DNA片段在体外酶的作用下,在高温环境中复制出许许多多相同片段的一种方法,利用它能快速而特异地扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。

表1

PCR反应体系

50 μL

缓冲液

5 μL

脱氧核苷酸

1 μL

引物A

0.5 μL

引物B

0.5 μL

DNA聚合酶

0.5 μL

模板DNA  

1~2 μL

加去离子水补足至50 μL

 

       表2

反应条件

温度

时间

变性

95 ℃

30 s

复性

55 ℃

30 s

延伸

72 ℃

1 min

30个循环后

适宜

5~10 min

保温

4 ℃

2 h

 

(1)PCR技术的原理是模拟生物体内____________的过程。从上表中可得出,PCR技术与DNA复制相比较,主要区别之一是_____________________________________。此外,从反应条件看,所使用的DNA聚合酶应具有________的特点。

(2)PCR扩增过程中对DNA片段进行高温加热处理,其目的是____________________________________,其作用相当于细胞内________酶的作用。每次循环都需要2种引物的主要原因是________________________________________。

(3)下图为第1轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。

 

 

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PCR技术是把某一DNA片段在体外酶的作用下,合成许许多多相同片段的一种方法,利用它能快速而特异的扩增任何要求的目的或DNA分子片段;电泳技术则是在外电场作用下,利用分子携带的净电荷不同,把待测分子的混合物放在一定的介质(如琼脂糖凝胶)中进行分离和分析的实验技术,利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质和作亲子法学鉴定。下图中A~D是电泳装置及相应电泳结果。

请回答:

(1)

电泳与叶绿体色素分离采用的纸层析法比较,后者使用的介质是________。电泳过程中分子的迁移速率除与本身所带净电荷的多少有关外,你认为还受什么因素影响(至少列出一种)?________。

(2)

PCR技术能把某一DNA片段进行扩增,是依据什么原理?________。

(3)

图C是把含有21个氨基酸的多肽进行水解,得到的氨基酸混合物进行电泳的结果,故可推知该多肽是由________种氨基酸构成的。

(4)

图D通过提取某小孩和其母亲,以及待测定四位男性的DNA,分别由酶处理后,生成含有若干DNA片段,并已进行扩增得到的混合物,然后进行电泳所得到的一组DNA指纹图谱,请分析:谁是该小孩真正生物学上的父亲?为什么?

(5)

下面是PCR的反应体系及反应条件,请据此回答:

①请指出DNA分子复制所需的条件是:________、________、________和________。

与细胞核中DNA分子复制相比,95℃条件下变性30s的目的是:________。

反应体系中的缓冲液相当于细胞中的________。

②如果有反应体系中加入模板DNA分子100个,则经过30个循环后,DNA分子的数量将达到________个。

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(16分)Ⅰ.(8分)土壤农杆菌是一种能引起双子叶植物产生冠瘿瘤的土壤细菌,它带有一个大的质粒叫Ti质粒,它是携带细菌DNA向宿主植物基因组转化所需信息的重要片段,只有T—DNA片段才转入植物细胞的基因组。结构及转化过程如图所示,回答相关问题:

(1)为了使某种植物具有抗旱性状而又不引起植物产生冠瘿瘤,需对Ti质粒进行修饰,即祛除瘤基因,将抗旱基因转移至________,然后在一定条件下将外植体在含土壤农杆菌的稀释培养基上培养,此时修饰的T—DNA转入植物细胞并整合到植物基因组中。以上过程需要的工具有                                          。

(2)将上述外植体置于一个含有某种抗生素的合适培养基中进行筛选,发生转化的外植体开始增殖,形成________      ,通过产生不定芽再长出整个植物。

(3)基因转化是否成功应对转基因植物进行鉴定,可以直接在________水平对转基因植物与非转基因植物进行比较。

Ⅱ.(8分)请回答基因工程方面的有关问题:

(1)利用PCR技术扩增目的基因,其原理与细胞内DNA复制类似(如图所示)。

(1)图中引物为单链DNA片段,它是子链合成延伸的基础。

①从理论上推测,第四轮循环产物中不含有引物B的DNA片段所占的比例为      。

②在第    轮循环产物中首次出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。

(2)PCR反应体系中含有的DNA聚合酶具有           特点,下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能,这是因为                   。

 

 

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