题目列表(包括答案和解析)
PCR技术是将某一特定DNA片段在体外酶的作用下,复制出许许多多相同片段的一种方法,利用它能快速而特异地扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段。它的基本过程如下:
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[注图中“▄”表示每次扩增过程中需要的引物(用P代表)。每个引物含20个脱氧核苷酸,并分别与DNA片段两端碱基互补,其作用是引导合成DNA子链]请据图分析回答:
(1)PCR技术的原理是模拟生物体内__________________的过程。
(2)PCR扩增过程中对DNA片段进行高温加热处理,其目的是 ,其作用相当于细胞内__________酶的作用.
(3)在③适温延伸过程中,必需加一特定的DNA聚合酶,从图示中可判断,该酶与一般人体细胞中的DNA聚合酶相比,最主要的特点是______________。
(4)假如引物都用3H标记,从理论上计算,DNA片段经3次扩增所得的8个DNA分子中,含有3H 标记的DNA分子占 %。
(5)假定DNA片段含200对脱氧核苷酸,经3次扩增,从理论上计算,除需要引物14个外,还需要游离的脱氧核苷酸 个。
PCR技术是将某一特定DNA片段在体外酶的作用下,在高温环境中复制出许许多多相同片段的一种方法,利用它能快速而特异地扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。
表1
| PCR反应体系 | 50 μL |
| 缓冲液 | 5 μL |
| 脱氧核苷酸 | 1 μL |
| 引物A | 0.5 μL |
| 引物B | 0.5 μL |
| DNA聚合酶 | 0.5 μL |
| 模板DNA | 1~2 μL |
| 加去离子水补足至50 μL |
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表2
| 反应条件 | 温度 | 时间 |
| 变性 | 95 ℃ | 30 s |
| 复性 | 55 ℃ | 30 s |
| 延伸 | 72 ℃ | 1 min |
| 30个循环后 | 适宜 | 5~10 min |
| 保温 | 4 ℃ | 2 h |
(1)PCR技术的原理是模拟生物体内____________的过程。从上表中可得出,PCR技术与DNA复制相比较,主要区别之一是_____________________________________。此外,从反应条件看,所使用的DNA聚合酶应具有________的特点。
(2)PCR扩增过程中对DNA片段进行高温加热处理,其目的是____________________________________,其作用相当于细胞内________酶的作用。每次循环都需要2种引物的主要原因是________________________________________。
(3)下图为第1轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。
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(16分)Ⅰ.(8分)土壤农杆菌是一种能引起双子叶植物产生冠瘿瘤的土壤细菌,它带有一个大的质粒叫Ti质粒,它是携带细菌DNA向宿主植物基因组转化所需信息的重要片段,只有T—DNA片段才转入植物细胞的基因组。结构及转化过程如图所示,回答相关问题:
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(1)为了使某种植物具有抗旱性状而又不引起植物产生冠瘿瘤,需对Ti质粒进行修饰,即祛除瘤基因,将抗旱基因转移至________,然后在一定条件下将外植体在含土壤农杆菌的稀释培养基上培养,此时修饰的T—DNA转入植物细胞并整合到植物基因组中。以上过程需要的工具有 。
(2)将上述外植体置于一个含有某种抗生素的合适培养基中进行筛选,发生转化的外植体开始增殖,形成________ ,通过产生不定芽再长出整个植物。
(3)基因转化是否成功应对转基因植物进行鉴定,可以直接在________水平对转基因植物与非转基因植物进行比较。
Ⅱ.(8分)请回答基因工程方面的有关问题:
(1)利用PCR技术扩增目的基因,其原理与细胞内DNA复制类似(如图所示)。
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(1)图中引物为单链DNA片段,它是子链合成延伸的基础。
①从理论上推测,第四轮循环产物中不含有引物B的DNA片段所占的比例为 。
②在第 轮循环产物中首次出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。
(2)PCR反应体系中含有的DNA聚合酶具有
特点,下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能,这是因为
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