[题目]CAR--T细胞疗法是通过设计CAR基因.并导人癌症患者的T细胞中.使其转化为CAR-T细胞.CAR--T细胞膜上的CAR蛋白与癌细胞表面抗原特异结合后.激活CAR-T细胞使其增殖.分化.从而实现对癌细胞的特异性杀伤和记忆.主要过程如下图.请回答:(1)要获取CAR基因.可采取PCR技术进行大量扩增.前提是 .(2)将CAR基因导人患者T细� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】CAR--T细胞疗法是通过设计CAR基因，并导人癌症患者的T细胞中，使其转化为CAR-T细胞，CAR--T细胞膜上的CAR蛋白与癌细胞表面抗原特异结合后，激活CAR-T细胞使其增殖、分化，从而实现对癌细胞的特异性杀伤和记忆。主要过程如下图。请回答：

（1）要获取CAR基因，可采取PCR技术进行大量扩增，前提是_________________________。

（2）将CAR基因导人患者T细胞前，需完成过程[①]___________________该过程中先要用___________切割含有CAR基因的DNA片段和_______，以形成相同的黏性末端，再用DNA连接酶连接形成pCDH-CAR， pCDH- -CAR上除了目的基因外，还有一些必须的部分，比如_________________，它是RNA聚合酶识别和结合的部位。

（3）完成过程②常用方法是____________法。此外，还可以先将CAR基因整合到逆转录病毒载体中，再利用病毒的________________性导人并将CAR基因整合到T细胞的_________________上。

（4）检测CAR- T 细胞中的CAR基因是否转录出了mRNA所采用的方法是_________________________。

（5）在将CAR--T细胞输给病人进行治疗之前，还需在实验室内进行细胞扩增培养。体外培养CAR-T细胞的培养液中除合成培养基的成分外，一般还需添加_____________________________________等天然成分。

【答案】CAR基因序列已知构建基因表达载体限制性核酸内切酶 pCDH质粒启动子显微注射侵染染色体DNA 分子杂交技术血清（血浆）

【解析】

根据题意可得，CAR-T细胞疗法实际为通过基因工程改变患者T细胞的基因，使其能够产生CAR蛋白以特异性杀伤癌细胞。过程①表示获得重组DNA分子，过程②表示将重组DNA分子转入受体细胞；过程③表示对癌细胞的特异性杀伤和记忆。

（1）利用PCR技术对CAR基因进行大量扩增的前提是CAR基因序列已知；

（2）CAR基因为目的基因，在将该基因导人患者T细胞前，需完成基因表达载体，即过程①；该过程需要用同种限制酶（限制性核酸内切酶）切割目的基因和运载体（pCDH质粒），以形成相同的黏性末端；基因表达载体上RNA聚合酶识别和结合的部位是启动子；

（3）过程②表示将重组DNA分子转入受体细胞，动物细胞常用方法为显微注射法；病毒为寄生生物，故可以利用病毒的侵染特性导入并将CAR基因整合到T细胞的染色体DNA上；

（4）目的基因的检测与鉴定的第二步是检测目的基因（CAR）基因是否转录出了mRNA，方法是分子杂交技术；

（5）动物细胞培养时常加入血清（血浆）等天然成分。

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