Question

【题目】我国科学家目前正在探索培育过量表达蔗糖转运蛋白基因（TaSUT1A）的转基因小麦，通过分析TaSUT1A在转基因小麦中的遗传及其在抗干旱环境中的作用，选育抗旱的转基因小麦新品种。小麦属于单子叶植物，下图为基本技术流程示意图。请回答下列问题：

（1）为了大量扩增分离得到的TaSUT1A，一般采用的技术是______________，该技术扩增目的基因的前提条件是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，其目的是______________________________。

（2）一般采用相同的_______切割目的基因片段与载体，原因是_________________。

（3）将构建好的基因表达载体导入小麦细胞常用____________法，但成本较高；受体细胞经脱分化形成愈伤组织，脱分化是让已经分化的细胞经诱导后失去其______________________的过程。

（4）为了证明TaSUT1A是否表达，可以通过______________检测有无蔗糖转运蛋白生成，并通过与________________中蔗糖转运蛋白含量的对比来确定TaSUT1A是否过量表达。

Answer 1

【答案】PCR技术 根据这一序列合成引物 限制性核酸内切酶（或限制酶） 获得相同的黏性末端 基因枪 特有的结构和功能而转变成未分化细胞 抗原-抗体杂交 普通正常小麦

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）为了大量扩增分离得到的TaSUT1A，一般采用的是PCR技术，该技术扩增目的基因的前提条件是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，其目的是根据这一序列合成引物。

（2）一般采用相同的限制酶切割目的基因片段与载体，这样可获得相同的黏性末端，便于DNA连接酶连接。

（3）将构建好的基因表达载体导入小麦细胞常用基因枪法。愈伤组织在结构形态上的特点是呈无固定形态的薄壁细胞。脱分化是让已经分化的细胞经诱导后失去其特有的结构和功能而转变成未分化细胞的过程。

（4）为了证明TaSUT1A是否表达，可以通过抗原-抗体杂交检测有无蔗糖转运蛋白生成，并通过与普通正常小麦中蔗糖转运蛋白含量的对比来确定TaSUT1A是否过量表达。