Question

【题目】回答下列（一）、（二）小题：

（一）下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图。请据图回答：

（1）过程①和②必需用到的酶有____________ 、______________ 。

（2）重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有_____________才能构成一个完整的基因表达载体（写出一点即可）。

（3）检测到_________________说明转基因克隆猪已经成功。水母的基因能够在小猪体内成功表达的原因是_____________________________________。

（4）绿色荧光蛋白基因所控制的遗传特性，能在转基因克隆猪亲子代中，稳定维持和表达最关键的是__________________________________。

（5）图示过程中运用到的生物工程技术有________________________________（至少写出3个）。

（二）胚胎干细胞（ES细胞）介导法是转基因动物培育的途径之一，请据下图某转基因老鼠的培育流程回答相关问题：

（1）胚胎干细胞是由早期胚胎中分离出来的一类细胞，在形态上，表现为_________（至少写出2点），在体外培养的条件下具有__________的特点。

（2）将修饰后的外源基因导入ES细胞常采用的方法是__________；培养过程中，ES细胞所需的气体主要有02和C02，其中02是__________，C02用来维持培养液的PH值。

（3）为检测ES细胞的染色体上是否含有外源基因，在分子水平上可采用的方法是__________；图中④过程中要将含外源基因的ES细胞导入囊胚的__________。将得到的重组胚胎导入⑤体内，其存活的基础是__________。

Answer 1

【答案】限制性核酸内切酶 DNA连接酶 启动子、终止子、标记基因、复制原点 克隆猪体内含有绿色荧光蛋白 不同生物共用一套遗传密码子 绿色荧光蛋白基因整合到转基因克隆猪染色体DNA上 转基因技术、核移植技术、早期胚胎培养技术、胚胎移植技术 细胞体积小、细胞核大、核仁明显 可以增殖而不发生分化 显微注射法（技术） 细胞代谢必需的或用于细胞需氧呼吸 DNA分子杂交 内细胞团 受体子宫对外来胚胎不发生免疫排斥反应

【解析】

（一）据图分析，①表示获取绿色荧光蛋白基因，②表示基因表达载体的构建，③表示将目的基因导入受体细胞，④表示取供体细胞的细胞核，⑤表示去除卵母细胞的细胞核，⑥表示核移植，⑦表示早期胚胎的培养，⑧表示胚胎移植。

（二）分析图示：图为胚胎干细胞介导法培育转基因动物的流程，其中①表示将重组质粒导入受体细胞；②③表示培养筛选克隆细胞过程；④表示将转基因的胚胎干细胞注射到受体动物胚胎；⑤表示胚胎移植过程；⑥表示形成嵌合体。

（一）（1）①过程表示获取目的基因，必需用到限制性核酸内切酶（限制酶），②表示基因表达载体的构建，需要用限制性核酸内切酶切出黏性末端，并用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA。
（2）重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有启动子、终止子、标记基因、复制原点才能构成一个完整的基因表达载体。
（3）转基因克隆猪已经成功，说明已经在克隆猪体内检测到绿色荧光蛋白，水母的基因能够在小猪体内成功表达的原因是不同生物共用一套遗传密码子。
（4）绿色荧光蛋白基因所控制的遗传特性，能在转基因克隆猪亲子代中，稳定维持和表达最关键的是绿色荧光蛋白基因整合到转基因克隆猪染色体DNA上。
（5）图示过程中运用到的生物工程技术有转基因技术、核移植技术、早期胚胎培养技术、胚胎移植技术。

（二）（1）胚胎干细胞是由早期胚胎中分离出来的一类细胞，在形态上，表现为细胞体积小、细胞核大、核仁明显，在体外培养的条件下具有可以增殖而不发生分化的特点。
（2）将修饰后的外源基因导入ES细胞常采用的方法是显微注射法；培养过程中，ES细胞所需的气体主要有O2和CO2，其中O2是细胞代谢所必需的或用于细胞需氧呼吸，CO2用来维持培养液的PH值。
（3）为检测ES细胞的染色体上是否含有外源基因，在分子水平上可采用的方法是DNA分子杂交；图中④过程中要将含外源基因的ES细胞导入囊胚的内细胞团。将得到的重组胚胎导入⑤体内，其存活的基础是受体子宫对外来胚胎不发生免疫排斥反应。