Question

【题目】回答下列（一）、（二）小题：

（一）科研人员从山西老陈醋的醋醅中分离出产酸能力强的醋杆菌，回答下列相关问题：

（1）已知溴甲酚紫 pH 变色范围是5.2（黄色）～6.8（紫色）。在分离醋杆菌用的培养基中加入溴甲酚紫作为_______以鉴别产醋杆菌。配制培养基时，加入经 _________灭菌的乙醇，乙醇的主要作用是___________。

（2）三角瓶、试管、培养皿等用牛皮纸或报纸包扎好后置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，要注意灭菌物品不能放太满太挤，要留出空隙以利于______。灭菌后，通常将实验用具放入60℃～80℃的烘箱中烘干，目的是_________。

（3）取 10g 山西老陈醋的醋醅等梯度稀释，用 ___________取 10 -3、10-4、10 -5稀释度的样品稀释液0．1mL 涂布于平板分离培养基上，30℃倒置培养48h。若要筛选产酸能力强的菌种，需挑选若干个 ___________比值大的菌落，分别用________扩增，然后离心检测培养液中醋酸含量。

（二）胚胎干细胞（ES细胞）介导法的主要操作过程是：将外源基因导入胚胎干细胞，然后将转基因的胚胎干细胞注射于受体动物胚胎后可参与宿主的胚胎构成。如图是利用胚胎干细胞介导法培育出荧光小鼠的过程。回答下列问题：

（1）从水母中获取绿色荧光蛋白基因 有多种方法。将水母的全部基因用 _______切成片段，插入到载体分子中，并将所得的 _______转入大肠杆菌，通过_________使目的基因扩增，再用某种探针钓取目的基因。

（2）③过程常用________方法，④过程中饲养层的作用是_______，⑤过程注入的胚胎干细胞具有______ 特点，从而可分化成个体的各种组织和器官。在进行⑥之前，需对受体母鼠进行_______处理。

（3）关于受体母鼠妊娠产下的子代小鼠的特点，下列叙述正确的是_____________。

A．各细胞都有绿色荧光蛋白基因，所以全身每个细胞都有绿色荧光蛋白产生

B．各细胞都有绿色荧光蛋白基因，但只有部分细胞有绿色荧光蛋白产生

C．不是所有细胞都有绿色荧光蛋白基因，所以只有部分细胞有绿色荧光蛋白产生

D．该小鼠产生的配子中含绿色荧光蛋白基因的概率为1/2

Answer 1

【答案】（酸碱）指示剂 过滤灭菌/G6 玻璃砂漏斗 作为碳源 蒸汽流通 除去灭菌时的水分 取样器 黄色环带直径与菌落直径 液体培养基 限制性核酸内切酶 重组载体/重组 DNA/重组质粒 大肠杆菌的繁殖 显微注射的 促进胚胎干细胞的分裂，抑制胚胎干细胞的分化 发育全能性 同期发情 C

【解析】

据图分析，目的基因是绿色荧光蛋白基因，①表示获取目的基因，②表示构建基因表达载体（重组质粒），③表示将目的基因导入受体细胞（胚胎干细胞），④表示动物细胞（胚胎干细胞）培养，⑤表示将胚胎干细胞注入囊胚，⑥表示胚胎移植。

（一）（1）根据题意分析，溴甲酚紫在不同的pH条件下会变色，因此在分离醋杆菌用的培养基中加入溴甲酚紫作为（酸碱）指示剂以鉴别产醋杆菌；加入的乙醇可以为醋酸菌提供碳源，乙醇加入前需要经过过滤灭菌。

（2）高压蒸汽灭菌时，灭菌锅中的灭菌物品不能放太满太挤，要留出空隙以利于蒸汽流通；灭菌后，通常将实验用具放入60℃～80℃的烘箱中烘干，以除去灭菌时的水分。

（3）应该用取样器取稀释度的样品稀释液；溴甲酚紫在酸性条件下变黄，所以若要筛选产酸能力强的菌种，需挑选若干个黄色环带直径与菌落直径比值大的菌落，分别用液体培养基扩增，然后离心检测培养液中醋酸含量。

（二）（1）将水母的全部基因切成片段需要用限制酶（限制性核酸内切酶），然后插入到载体分子中形成重组载体（重组质粒），再转入大肠杆菌，通过大肠杆菌的繁殖使目的基因扩增。

（2）③表示将目的基因导入受体细胞（胚胎干细胞），常用显微注射法；④表示胚胎干细胞的培养过程，该过程中饲养层的作用是促进胚胎干细胞的分裂，抑制胚胎干细胞的分化；⑤过程注入的胚胎干细胞具有发育全能性，从而可分化成个体的各种组织和器官；⑥表示胚胎移植，在胚胎移植之前，需对受体母鼠进行同期发情处理。

（3）据图分析可知，将含有绿色荧光蛋白基因的胚胎干细胞注入囊胚，而囊胚中的原有细胞是不含绿色荧光蛋白基因的，因此胚胎移植后产生的小鼠并不是所有细胞都有绿色荧光蛋白基因，所以只有部分细胞有绿色荧光蛋白产生。

故选C。