2007年度诺贝尔生理学或医学奖授予了美国科学家马里奥·R·卡佩奇和奥利弗·史密西斯、英国科学家马丁·J·埃文斯，奖励他们创造了一套完整的“基因敲除小鼠”的方式。所谓“基因敲除小鼠”，就是先在小鼠的胚胎干细胞上通过基因重组的办法进行基因修饰，即将胚胎干细胞中的某基因改掉，然后将“修饰”后的胚胎干细胞植入小鼠的早期胚胎，生成嵌合体小鼠。这种嵌合体小鼠长大后，体内同时存在被“修饰”过的基因和未被“修饰”的基因。如果某些小鼠的生殖细胞恰巧被“修饰”过，则它们就会生出基因完全被“修饰”过的小鼠。据所学知识回答下列问题：

　 (1)切割目的基因时，如上图所示，该限制酶能识别的碱基序列是________，切点在________之间。

　 (2)将目的基因转入小鼠胚胎干细胞后，胚胎干细胞能够发育成转基因小鼠，所依据的生物学原理是________。胚胎干细胞在体外培养的条件下可以增殖而不发生________，但通过体外定向诱导，能培育出人造________。

　 (3)从胚胎干细胞转化到获得目的基因纯合子，并配合基因检测，最少需要代。育种过程是：检测目的基因→________→从中选出目的基因纯合的个体。

　 (4)基因敲除技术中存在着一个难以克服的缺陷：敲除了某个基因后，可能不会产生容易识别的表型改变，因此就不能获知该基因的功能，请你分析原因：________________________________________________________________________。

下列说法不正确的组合是（    ）

①病毒是生物，其主要理由是由于具有蛋白质和核酸

②细菌等单细胞生物体具有生命的基本特征

③一切生物的生命活动都是在细胞内或在细胞参与下完成的

④细胞是一切生物体结构和功能的基本单位

A. ③ ④         B.① ②         C. ② ③         D.① ④

下列说法全部不正确的组合是（     ）

①病毒是生物，其主要理由是由于具有蛋白质和核酸

②细菌等单细胞生物体具有生命的基本特征

③一切生物的生命活动都是在细胞内或在细胞参与下完成的

④细胞是一切生物体结构和功能的基本单位

A. ③ ④            B.① ②           C. ② ③              D.① ④

下列说法全部不正确的组合是（    ）
①病毒是生物，其主要理由是由于具有蛋白质和核酸
②细菌等单细胞生物体具有生命的基本特征
③一切生物的生命活动都是在细胞内或在细胞参与下完成的
④细胞是一切生物体结构和功能的基本单位

 请回答下列有关基因工程的问题：

（1）如果用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的          片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群体就叫做这种生物的           。

（2）目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为        。将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是         法。转基因动物中采用最多，也是最为有效的一种将目的基因导入动物细胞的方法是        。大肠杆菌最常用的转化方法是：首先用Ca²⁺处理细胞，使细胞处于一种              的生理状态，这种状态的细胞被称作感受态细胞。然后将重组表达载体DNA溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度条件下促进                       ，完成转化过程。

（3）目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。首先，要检测转基因生物        上是否插入了目的基因。其次，还需要检测目的基因是否          。最后检测目的基因是否           。

(4)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似。PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为        

                                                                             。

(5)用限制酶EcoRV、Mbol单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1 kb

  即1000个碱基对)，请在下图质粒上画出EcoRV、Mbol的切割位点。

（6）基因工程中使用的限制酶，其特点是                                          。