回答下列有关基因工程和克隆技术的问题。（10分）

2006年12月22日，我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

63、说出绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程中用到了哪些生物工程技术？           　

利用了哪些原理？                      （本题答案从下列所给选项中选择填写）

①转基因技术；②细胞核移植技术；③胚胎移植技术；④干细胞技术；⑤动物细胞培养技术

⑥基因突变；⑦基因重组；⑧动物细胞核具有全能性；⑨动物细胞具有全能性

64、过程①②中必需用到的酶分别是                和                 。绿色荧光蛋白基因之所以能与质粒重组，原因是                                               。

65、早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及               等物质。

通过上图中过程①的方法获取目的基因的数量是有限的，要获得大量的绿色荧光蛋白基因可以利用PCR技术。PCR扩增反应（如下图所示）中加入的TaqDNA聚合酶能在接近沸点的条件下，发挥延伸DNA子链的作用，将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上。请回答：

PCR（DNA聚合酶链式反应）技术示意图：

66、你认为TaqDNA聚合酶一定是从下列哪种生物体细胞中分离提取的？        

A．水母细胞         B．猪胎儿成纤维细胞   　C．极端嗜热菌     D．大肠杆菌

67、下面的表达式不能反映TaqDNA聚合酶的功能，为什么？                           。

68、用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点和标出碱基对数。（2分）

进化的研究必然从历史中获得大量启示，包括进化论的发展史。请判断下列哪些陈述

是正确的？

    A．林奈假设 一个属中的所有物种可能起源于同一个祖先物种，是祖先物种分化后又

通过形成可育杂种的途径繁殖而成的一个生物类群

    B．居维叶提出了门具有统一结构图案的思想，并认为它是亲缘关系和共同起源的证据

    C．根据冯?贝尔的观点，个别动物胚胎发育所遵循的规律也是整个动物界发育所遵循的规律

    D．达尔文创立了以自然选择理论为核心的生物进化论，放弃了获得性状遗传的观点

2011年12月19日，在“中国（无锡）动物生物反应器产业高峰论坛”上，中国工程院院士李宁介绍：把牛奶变成母乳，这绝对是可能的。而把牛奶变成“人奶”的技术，就称之为“动物生物反应器”。动物生物反应器是以基因工程技术为核心，以动物体为“车间”，低成本大规模生产高附加值重组药物蛋白的新一代生物制药技术。下图是培育表达人类白细胞介素的牛乳腺生物反应器的技术路线。据图回答下列问题：

（1）基因工程的核心步骤是                  。图中基因表达载体的组成，除具有复制原点、人类白细胞介素基因外，还必须具有启动子、                 等。启动子是一段有特殊结构的DNA片段，是         识别和结合的部位。

（2）过程①可采用的操作方法是            ，过程③采用的生物技术是        。在②过程的生物技术中，需对供体牛和受体牛进行         处理，为供体的胚胎移入受体提供相同的生理环境。

（3）为检测人类白细胞介素基因是否成功表达，可采用          技术。

（4）继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。该系统与乳腺生物反应器相比，具有哪些优点？（答出一点即可）

（5）为使外源基因在后代中长期保持，可将转基因动物体细胞的细胞核转入       中构成重组细胞，然后再运用一定的生物技术手段使其发育成与供体具有相同性状的个体。

请从A、B两题中任选一题做答，并将答案按顺序填在答题纸上。

A:【现代生物科技专题】

胚胎工程的许多技术，实际是在体外条件下，对动物自然受精和早期胚胎发育条件进行的模拟操作。

    哺乳动物精子的发生是在_____________内完成的，精子细胞中的______________在变形过程中发育成顶体。

    在受精的过程中，为防止多精入卵，卵子会发生_____________和_________________两道屏障。

    受精后，合子即在_______________内进行有丝分裂，开始发育，从_______________期起细胞开始出现分化，在_______________期后，透明带破裂，胚胎完成孵化。

B:【生物——生物技术实践】

下图是月季花药离体培养产生花粉植株的两种途径，请据图回答有关问题：

选用的材料合适与否是成功诱导出花粉植株的重要因素，一般来说选用___________期的花粉可提高成功率。选择花粉时，一般要通过____________来确定花粉是否处于合适的发育期，这时需要对花粉的细胞核进行染色，常用的染色剂是____________。

上图中花药经脱分化产生胚状体还是愈伤组织主要取决于培养基中____________。

胚状体与愈伤组织在结构上的主要区别在于愈伤组织的细胞排列疏松无规则，是一种高度____________的薄壁细胞，胚状体与____________发育形成的胚有类似的结构，即具有胚芽、胚轴和胚根。

无菌技术也是成功诱导出花粉植株的重要因素，请说明下列各项中哪些需要高温灭菌________________________（填编号）。

①培养基，②培养皿，③接种环，④花蕾，⑤实验操作者的双手，⑥三角锥形瓶

（10分）世界卫生组织解释克隆为“遗传上同一的机体或细胞系（株）的无性繁殖”。相对于植物克隆而言，动物尤其是高等动物的克隆比较困难，下图表示哺乳动物克隆的几种方法的主要步骤，据图回答下列问题：

（1）方法2获得的小牛的遗传物质来源于供体             。方法3中①和②发育成的小牛的遗传物质         。（相同／不同）
（2）细胞B取自囊胚的          ，具有全能性，称为           细胞。囊胚        （已经／尚未）出现分化。
（3）应用图示方法        得到小牛与供体1遗传物质最相似。
（4）克隆也可以理解为复制、拷贝，结合世界卫生组织的定义，你认为还有哪些现代生物技术也属于克隆           。
（5）2009年3月9日，美国总统奥巴马签署行政令，决定解除对使用联邦政府资金支持胚胎干细胞研究的限制。对此，各界反应不一，你的态度及理由是                 。