下表中列出几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题。

（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有　　　　个游离的磷酸基团。

（2）若对图中质粒进行改造，插入SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越　　　。用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ，原因是　　　　　　　　　　。

（3）与使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止　　　　　　　。

（4）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入　　　酶。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了　　　　　　　。

（5）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在　　　　　　　　　的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

 

（8分）根据模拟制作重组DNA分子的活动，甲DNA分子、乙DNA分子被EcoRI （作用于G A A T T C序列）酶切后，即可获得所需的目的基因和质粒。回答以下问题：

（1）绿色硬纸板（甲DNA分子）的碱基序列为：

        ……A T A G C A T G C T A T C C A T G A A T T C G G C A T A C……

        ……T A T C G T A C G A T A G G T A C T T A A G C C G T A T G……

     红色硬纸板（乙DNA分子）的碱基序列为：

        ……T C C T A G A A T T C T C G G T A T G A A T T C C A T A C……

        ……A G G A T C T T A A G A G C C A T A C T T A A G G T A T G……

 其中，           DNA分子（填甲或乙）含有“目的基因”， 另一个 DNA分子即是“质粒”。

 （2）用剪刀代表酶的切割。酶切位点在         （a处还是b处），此化学键称为               。请用“||”在甲、乙两DNA分子上标出EcoRI的作用位点。（2分）

 （3）你模拟插入的DNA片断能称得上一个基因吗？             。（填能或不能）

（4）从基因文库中获取目的基因是常用方法，基因文库实际上就是指导入了某种生物不同基因的许多DNA片断的受体菌的群体。按照其中所含基因量的多少又可分为               文库和              文库。

 

6．(抚顺高中2013月考)“滔滔”是我国第一例转入人体白蛋白基因的转基因试管牛，人们利用该转基因奶牛的乳汁生产人类血清白蛋白。

(1)试管动物实际上是体外受精与胚胎移植两项技术的综合运用。体外受精前需要对奶牛的精子进行__________处理，方法是将精子放入一定浓度的__________或钙离子载体A23187溶液中。防止多精入卵的生理反应包括________________和________________。胚胎工程的终端环节是胚胎移植。移植后的胚胎能在受体子宫内存活的生理基础是______________。

(2)人体白蛋白基因通常可以从基因文库中获取，含有一种生物所有基因的文库称为______________，获得人体白蛋白基因后可以利用__________技术进行扩增。基因工程的核心步骤是________________________。人体白蛋白基因一般利用____________技术导入牛的受精卵中，当受精卵分裂到囊胚期时，需要取囊胚的__________细胞进行性别鉴定，以确保发育成熟的牛能分泌乳汁。

下表中列出几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点，请回答下列问题

限制酶	BamHⅠ	Hind Ⅲ	EcoRⅠ	SmaⅠ
识别序列及 切割位点	G↓GATC C C CTAG↑G	A↓AGCT T T TCGA↑A	G↓AATT C C TTAA↑G	CCC↓GGG GGG↑CCC

(1)一个图Ⅰ所示的质粒分子经SmaⅠ切割后，含有        个游离的磷酸基因
(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越               
(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是                                          .
(4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BmaHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止             。
(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入               酶
(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了               。
(7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在         的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测

2008年1月7日，东北农业大学培育出我国第二代绿色荧光蛋白转基因克隆猪。这项技术为家猪的目标育种、人类疾病医疗模型猪的建立以及生产为人类器官移植提供器官的特殊家猪提供了可靠技术平台。结合基因工程技术和胚胎工程技术回答问题：

（1）基因工程是在           水平上进行设计和施工的，实现操作过程至少需要三种工具，即           、             和载体。

（2）若想获取转基因克隆猪的目的基因可从基因文库中获取、            技术扩增及DNA合成仪人工合成。

（3）基因工程的核心是                          。

（4）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射          的方法，做超数排卵处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到      期即可通过显微操作将其细胞核去除。

（5）若对获得的转基因克隆猪作检测与鉴定，首先要检测的是                      ，这是目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键。