酶解法制备原生质体的原理是利用酶溶液对细胞壁成分的降解作用。蜗牛酶液从蜗牛（以植物为食）消化腺中提取；果胶酶、纤维素酶从微生物中提取。为了研究不同酶液的酶解效果，某实验小组取无菌烟草幼叶，切成相同大小的小片，等量放入6支试管中，试剂用量和实验结果列于下表。请回答有关问题：

试管编号 项目	I	Ⅱ	Ⅲ	Ⅳ	V	Ⅵ
蒸馏水(mL)	2	O	1	1	1	1
缓冲液(mL)	0	2	1	0.5	0.5	0.5
果胶酶液(mL)	O	0	O	0.5	O	0
蜗牛酶液(mL)	O	0	O	O	0.5	0
纤维素酶液(mL)	0	O	0	O	0	0.5
实验结果(绿色深浅程度)	-	-	- -	+++	++++	++

（注：“+”越多表示绿色越深，“-”表示颜色无显著变化）
（1）加入酶液后要轻摇试管的目的是__________。
（2）用网筛过滤原生质体到离心管内，离心后收集沉淀物，并用__________洗涤。
（3）从绿色的深浅可推测：蜗牛酶液酶解效果最好，原因是蜗牛酶液含有__________等多种酶。该实验中________是空白对照组，其设置意义是______________________。
（4）收集的原生质体是否符合要求还需进行检验，如何检验？_____________。

酶解法制备原生质体的原理是利用酶溶液对细胞壁成分的降解作用。蜗牛酶液从蜗牛（以植物为食）消化腺中提取；果胶酶、纤维素酶从微生物中提取。为了研究不同酶液的酶解效果，某实验小组取无菌烟草幼叶，切成相同大小的小片，等量放入6支试管中，试剂用量和实验结果列于下表。请回答有关问题：

试管编号 项目	I	Ⅱ	Ⅲ	Ⅳ	V	Ⅵ
蒸馏水(mL)	2	O	1	1	1	1
缓冲液(mL)	0	2	1	0.5	0.5	0.5
果胶酶液(mL)	O	0	O	0.5	O	0
蜗牛酶液(mL)	O	0	O	O	0.5	0
纤维素酶液(mL)	0	O	0	O	0	0.5
实验结果(绿色深浅程度)	-	-	- -	+++	++++	++

（注：“+”越多表示绿色越深，“-”表示颜色无显著变化）

（1）加入酶液后要轻摇试管的目的是__________。

（2）用网筛过滤原生质体到离心管内，离心后收集沉淀物，并用__________洗涤。

（3）从绿色的深浅可推测：蜗牛酶液酶解效果最好，原因是蜗牛酶液含有__________等多种酶。该实验中________是空白对照组，其设置意义是______________________。

（4）收集的原生质体是否符合要求还需进行检验，如何检验？_____________。

 

酶解法制备原生质体的原理是利用酶溶液对细胞壁成分的降解作用。蜗牛酶液从蜗牛（以植物为食）消化腺中提取；果胶酶、纤维素酶从微生物中提取。为了研究不同酶液的酶解效果，某实验小组取无菌烟草幼叶，切成相同大小的小片，等量放入6支试管中，试剂用量和实验结果列于下表。请回答有关问题：

试管编号 项目	I	Ⅱ	Ⅲ	Ⅳ	V	Ⅵ
蒸馏水(mL)	2	0	1	1	1	1
缓冲液(mL)	0	2	1	0.5	0.5	0.5
果胶酶液(mL)	0	0	0	0.5	0	0
蜗牛酶液(mL)	0	0	0	0	0.5	0
纤维素酶液(mL)	0	0	0	0	0	0.5
实验结果(绿色深浅程度)	-	-	- -	+++	++++	++

（注：“+”越多表示绿色越深，“-”表示颜色无显著变化）

（1）实验中加入缓冲液的作用是__________。

（2）用网筛过滤原生质体到离心管内，离心后收集沉淀物，并用__________渗溶液洗涤。

（3）从绿色的深浅可推测：蜗牛酶液酶解效果最好，原因是蜗牛酶液含有__________等多种酶。该实验中________是空白对照组，其设置意义是______________________。

（4）原生质体是否符合要求还需进行检验，如何检验？_____________________________。

研究人员为了制备烟草（四倍体,4n=48）的叶片细胞与紫罗兰（二倍体，2n=14）的紫色花瓣细胞的原生质体，并诱导其融合形成紫罗兰烟草植株，进行了如下实验：
一、原生质体的制备
酶解法制备原生质体的原理是利用酶溶液对细胞壁成分的降解作用。蜗牛酶液从蜗牛（以植物为食）消化腺中提取；果胶酶、纤维素酶从微生物中提取。为了研究不同酶液的酶解效果，某实验小组取无菌烟草幼叶，切成相同大小的小片，等量放入6支试管中，试剂用量和实验结果列于下表。请回答有关问题。

试管编号 项目	Ⅰ	Ⅱ	Ⅲ	Ⅳ	V	Ⅵ
蒸馏水（mL）	2	0	1	1	1	1
缓冲液（mL）	0	2	1	0.5	0.5	0.5
果胶酶液（mL）	0	0	0	0.5	0	0
蜗牛酶液（mL）	0	0	0	0	0.5	0
纤维素酶液（mL）	0	0	0	0	0	0.5
实验结果（绿色深浅程度）	—	—	—	+ + +	+ + + +	+ +

（注：“+”越多表示绿色越深，“—”表示颜色无显著变化）
（1）实验过程中，需要轻摇试管，其目的是                            ，使原生质体从叶小片中游离出来，以便观察悬浮液绿色的深浅。
（2）从绿色的深浅可推测：蜗牛酶液酶解效果最好，原因是蜗牛酶液含有         
等多种酶。该实验中           是空白对照组，其设置意义是      　　     。
（3）如果对制取的烟草叶肉细胞原生质体是否还有活性进行检验，其检验的方法可以是                       。
二、用同样方法制取紫罗兰花瓣细胞原生质体悬浮液
三、原生质体融合

将等量的紫罗兰花瓣细胞原生质体悬浮液与烟草叶肉细胞原生质体悬浮液加入到装有20%的PEG溶液的离心管中混合后，离心10min，将分离得到的融合成团的原生质体悬浮液与含有琼脂的液体培养基混合均匀后，凝固形成很薄的平板。再利用有关显微镜观察、鉴定融合的原生质体。请分析：
（4）步骤三中，若所有的原生质体均两两融合，则所得到的某一个融合的原生质体中含有的染色体数可能是                。
（5）只利用显微镜观察，不借助其他手段       
   （能，不能）鉴别出杂种融合的原生质体，你所依据的观察现象是                         。
四、制取紫罗兰烟草的人工种子
（6）如右图2中，包埋形成人工种子过程中，先适当加热使海藻酸钠溶化，然后将溶化的海藻酸钠溶液                      ，再加入                  充分搅拌混合均匀。
若将得到的人工种子播种后成长为成紫罗兰烟草植株，杂种植株为      倍体。

研究人员为了制备烟草（四倍体,4n=48）的叶片细胞与紫罗兰（二倍体，2n=14）的紫色花瓣细胞的原生质体，并诱导其融合形成紫罗兰烟草植株，进行了如下实验：

一、原生质体的制备

酶解法制备原生质体的原理是利用酶溶液对细胞壁成分的降解作用。蜗牛酶液从蜗牛（以植物为食）消化腺中提取；果胶酶、纤维素酶从微生物中提取。为了研究不同酶液的酶解效果，某实验小组取无菌烟草幼叶，切成相同大小的小片，等量放入6支试管中，试剂用量和实验结果列于下表。请回答有关问题。

试管编号 项目	Ⅰ	Ⅱ	Ⅲ	Ⅳ	V	Ⅵ
蒸馏水（mL）	2	0	1	1	1	1
缓冲液（mL）	0	2	1	0.5	0.5	0.5
果胶酶液（mL）	0	0	0	0.5	0	0
蜗牛酶液（mL）	0	0	0	0	0.5	0
纤维素酶液（mL）	0	0	0	0	0	0.5
实验结果（绿色深浅程度）	—	—	—	+ + +	+ + + +	+ +

（注：“+”越多表示绿色越深，“—”表示颜色无显著变化）

（1）实验过程中，需要轻摇试管，其目的是                             ，使原生质体从叶小片中游离出来，以便观察悬浮液绿色的深浅。

（2）从绿色的深浅可推测：蜗牛酶液酶解效果最好，原因是蜗牛酶液含有         

等多种酶。该实验中            是空白对照组，其设置意义是       　　      。

（3）如果对制取的烟草叶肉细胞原生质体是否还有活性进行检验，其检验的方法可以是                        。

二、用同样方法制取紫罗兰花瓣细胞原生质体悬浮液

三、原生质体融合

将等量的紫罗兰花瓣细胞原生质体悬浮液与烟草叶肉细胞原生质体悬浮液加入到装有20%的PEG溶液的离心管中混合后，离心10min，将分离得到的融合成团的原生质体悬浮液与含有琼脂的液体培养基混合均匀后，凝固形成很薄的平板。再利用有关显微镜观察、鉴定融合的原生质体。请分析：

      （4）步骤三中，若所有的原生质体均两两融合，则所得到的某一个融合的原生质体中含有的染色体数可能是                 。

  （5）只利用显微镜观察，不借助其他手段        

    （能，不能）鉴别出杂种融合的原生质体，你所依据的观察现象是                          。

四、制取紫罗兰烟草的人工种子

（6）如右图2中，包埋形成人工种子过程中，先适当加热使海藻酸钠溶化，然后将溶化的海藻酸钠溶液                       ，再加入                   充分搅拌混合均匀。

若将得到的人工种子播种后成长为成紫罗兰烟草植株，杂种植株为       倍体。