下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是

A.操作顺序为配制培养基、调节pH、分装、灭菌、包扎、搁置斜面

B.琼脂在制备固体培养基时，可作为凝固剂

C.将培养基冷却至50℃左右时进行搁置斜面

D.将培养基趁热分装到试管中，培养基的高度约为试管高度的1∕5

 

（15分）纤维素酶对于能否实现乙醇工业化生产、处理服装面料等具有重要的意义，研究者初步筛选到能合成纤维素酶的菌株MC-1，以下是该菌株的鉴定过程。

（1）为了获得能合成纤维素酶的单菌落，可采用           法将初筛菌液接种在固体培养基上，这种培养基属于       培养基。

（2）关于制备固体培养基的叙述，错误的是             

A．制作固体培养基时可以加入琼脂。

B．操作的顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌。

C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板。

D．待平板冷却凝固约5-10min后将平板倒过来放置。

（3）实验过程中如何防止其他微生物的污染？                         。

表5

（4）下表的培养液pH均为4.8，若对MC-1中纤维素酶的活力进行测定，则不能选择表中的        的培养液。（多选）

5）分离获得了具有较高纤维素酶活性的菌株MC-1，为了在此基础上获得纤维素酶活性更高的菌株，最可行的做法是                                。

（6）某同学在培养过程中发现培养基上感染了几种细菌。若在以尿素为唯一氮源的培养基中加入________指示剂培养几种菌后，指示剂变红就可以鉴定其中含有能够分解尿素的菌；若在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入________染料，培养后，培养基中出现透明圈，就可以鉴定其中含有纤维素分解菌。

 

2．(17分)(2012·南昌一模)尿素是一种重要的农业肥料，需经细菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：

(1)如图是利用________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步________到培养基的表面。除此方法外，常用的微生物接种方法还有________(写一种)。

(2)如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行________，灼烧的接种环冷却后才能接种的原因是______________________。

(3)下面是两种培养基的配方：

表1：A培养基配方

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4·7H2O	葡萄糖	尿素	琼脂	H2O
1.4 g	2.1 g	0.2 g	10.0 g	1.0 g	15.0 g	1 000 mL

表2：B培养基配方

纤维素粉	Na2HPO4·	NaNO37H2O	KH2PO4	MgSO4·7H2O	KCl	酵母粉膏	H2O
5 g	1 g	1.2 g	0.9 g	0.5 g	0.5 g	0.5 g	1 000 mL

①配制培养基的操作步骤________(用字母顺序回答)。

a．倒平板　b．计算　c．溶化　d．称量　e．灭菌

②通常培养基采用____________法灭菌，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是________________________。

③如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择上述________(A、B)配方的培养基，在该培养基中加入________指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。

④据B培养基的成分，所培养微生物的同化作用类型是________。

(4)如果进一步从尿素分解菌中提取出DNA，利用PCR技术扩增，则每次循环复制可分为________________三步。而尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它们能合成________，该物质被提取出后的纯化方法通常是____________________________________________________。

(5)在微生物培养过程中，常需要对微生物进行计数，血球计数板是常用的工具，血球计数板的计数室长和宽各为1 mm，深度为0.1 mm，其中25×16型的血球计数板计数室以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格。一般计数时选取的中方格位于计数室的____________________。下图表示的是其中一个中方格的情况，对该中方格中的酵母菌进行计数的结果是________个。如果计数的几个中方格中的细胞平均数为20个，则1 mL培养液中酵母菌的总数为________个。

(6)抗生素可由微生物产生，具有抑菌作用，能在琼脂培养基中扩散。在筛选产生抗生素的菌种时，先在琼脂培养基平板上划线接种一种从土壤中获得的甲菌，在27 ℃下培养3天，形成菌落。然后接种乙、丙、丁三种致病菌(图A)，继续在同样条件下培养3天，结果如图B。分析结果，得出的结论是(　　)

①甲菌产生了抗生素　②丁菌的生长被丙菌产生的抗生素抑制　③乙菌的生长被甲菌产生的抗生素抑制　④丙菌产生的抗生素抑制了乙菌的生长

A．①③　　　　　　B．①④

C．②③　　　　　　D．②④

某生物实验室要进行大肠杆菌的培养和分离及植物组织培养实验。现有以下几种试剂供实验用：

A.生长素溶液　B．脱落酸溶液　C．秋水仙素溶液　D．琼脂

E．细胞分裂素溶液　F．赤霉素溶液

请在空白处填空：

(1)大肠杆菌的培养和分离实验中，先用LB________进行扩大培养，再在LB固体平面培养基上进行________分离。在配制固体培养基时，为了使培养基凝固需用到的上述试剂是________。在培养基上完成接种后，需将培养皿倒置，目的是____________________，然后置于恒温箱中培养。

(2)用MS培养基进行植物组织培养实验的基本过程：植物细胞→愈伤组织→丛状苗→试管苗。若用成熟花粉培养，得到的试管苗是________植株。以上过程需要加入上述试剂中的________两种物质刺激，且不同的培养时期这两种物质的比例不相同，当其中的________浓度较高时主要是促使其长芽。愈伤组织中细胞的分裂方式是________，愈伤组织中的一部分细胞长成根，而另一部分细胞却长成芽，原因是细胞发生了分化，实质是________。

(3)MS培养基和LB培养基配制好后都需要进行________、分装和灭菌处理。

 

下面是某同学做自生固氮菌分离实验的方案和观察结果：

NaNO3:2g	K2HPO4: 1g
KCl: 0.5g	MgSO4: 0.5g
FeSO4:0.01g	蔗糖：30g
琼脂：15~20g	蒸馏水：1 000 mL

一、实验目的（略）

二、实验材料和用具（略）

三、实验方法和步骤

1.接种

（1）接种前，准备好盛有配方如上表的培养基，放入培养皿中并灭菌，供实验用。

（2）取10 g土壤，放在无菌研钵中，注入5 mL蒸馏水，并用无菌玻璃棒搅拌均匀，备用。

（3）将接种环放在酒精灯的火焰上灭菌。将培养皿盖轻轻放在桌面上，手拿培养皿。将接种环放在培养基边缘处冷却。然后，用接种环蘸取少许泥浆，轻轻地点接在培养基的表面上，共点接15~20处。

（4）接种后，轻轻地盖上培养皿盖，将培养皿放在实验桌上。

2.培养

将接种过的培养皿放入恒温箱内，在室温下培养3~4 d。

3.观察

3~4 d后，取出培养皿，仔细观察培养基上的菌落，其中大而扁平、边缘呈波状或锯齿状并为褐色菌落的为自生固氮菌。

4.镜检（略）

该实验方案和观察结果中有几处明显错误，请指出并改正。