材料：玉米等C₄植物的光合效率较水稻、小麦等C₃植物的高。磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）在其中起了很大的作用。C₄植物光合系统的浓缩CO₂从而增加局部CO₂浓度的机制，使其即使在CO₂浓度低时也能使光合作用接近饱和，从而大大提高其光合作用效率。因此，如何将C₄植物的这一机制转移到水稻等C₃植物上一直是植物生理学家的研究课题之一。但实践证明，常规杂交育种手段很难如愿以偿。最近，有人利用土壤农杆菌介导法，将完整的玉米PEPC基因导入到了C₃植物水稻的基因组中，为快速改良水稻等C₃植物的光合作用效率，提高粮食作物产量开辟了新途径。

（1）玉米和水稻很难利用常规杂交手段杂交的原因是                    。

（2）磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶在玉米叶片中的    （选填编号：A．叶肉细胞；B．维管束鞘细胞）里发挥作用，主要是对CO₂进行第一次固定，使CO₂转化为________化合物。

（3）若你是科研人员，你最好采用_______________途径从玉米中获得PEPC基因。

（4）获得PEPC基因后，将其导入土壤农杆菌的质粒中，以获得重组质粒，需要的工具酶是________________________酶和______________________酶。

（5）PEPC基因在水稻细胞中成功表达的标志是                          。

（6）得到PEPC基因成功表达的水稻细胞后，科研人员常采用细胞培养技术获得转基因水稻植株所依据的原理是_______________________________。

（09南充市适考）（共23分）

Ⅰ.玉米、高粱等C₄植物的光合效率较水稻、小麦等C₃植物的高。磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）在其中起了很大的作用。C₄植物光合系统有浓缩CO₂、增加局部CO₂浓度的机制，这样在CO₂浓度低时也能使光合作用接近饱和，从而大大提高光合作用效率。因此，如何将C₄植物的这一机制转移到水稻等C₃植物上一直是植物生理学家的研究课题之一。但实践证明，常规杂交育种手段很难如愿以偿。最近，有人利用土壤农杆菌介导法，将完整的玉米的PEPC基因导入到了C₃植物水稻的基因组中，为快速改良水稻等C₃植物的光合作用效率，提高粮食作物产量开辟了新途径。

（1）玉米和水稻很难利用常规杂交手段杂交的原因是_________________________。

（2）磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶在玉米叶片中的_________细胞里发挥作用，使CO₂转化为C₄化合物。

（3）若你是科研人员，你最好采用_______________________途径从玉米中获得PEPC基因。获得PEPC基因后，将其导入土壤农杆菌的质粒中，以获得重组质粒，需要的两种工具酶是___________________________。PEPC基因在水稻细胞中成功表达的标志是_________________________。得到PEPC基因成功表达的水稻细胞后，常采用____________技术获得转基因水稻植株，该技术所依据的原理是___________________________。

(4)经过黑暗处理的玉米植株，经较强阳光照射过的叶片脱色后，用碘液染色，利用这张叶片制作临时切片，放在显微镜下观察，可以观察到的现象是____________________________，因此确定玉米为C₄植物。鉴别植物是C₃还是C₄植物的简便方法还有_____________________。

Ⅱ.酵母菌是与人类密切相关的微生物。

（1）用酵母菌制啤酒时，为保证获得较多的酒精，生产上，必须首先通气，使其___________，一定时间后再密封，常用___________的方法延长积累酒精最多的时期。

（2）现有酵母菌、金黄色葡萄球菌、硝化细菌、圆褐固氮菌和乳酸菌混合在一起的液体。为将酵母菌从混合菌中分离出来，所用的固体培养基中应滴加适量的______________。

（3）下图为酵母菌中控制丙酮酸羧化酶合成的基因与其mRNA杂交的示意图。图中的______链是该基因转录时的模板链；该基因编码区中不能编码的序列是__________（填写图中序号）。