(9分)通过基因工程的方法，科学家采用花粉管通道法将毒蛋白基因转入棉花植株并获得成功表达。棉铃虫吃了这种转基因棉花的植株后就会死亡。花粉管通道法是指：利用植物花粉萌发时形成的花粉管通道将毒蛋白基因送入胚囊，进而导入尚不具备细胞壁的合子或早期胚体细胞中，借助天然的种胚系统，形成含有目的基因的种胚。请回答下列问题：

(1)下列所示的黏性末端是由__________（2分）种限制酶作用产生的。

(2)利用花粉管通道法将毒蛋白基因导入棉花细胞，此过程是基因工程操作步骤中的第三步，即__________。获取目的基因时，如果基因比较小，核苷酸序列又已知，则可以通过DNA合成仪用化学方法直接__________。

(3)该目的基因在导入受体细胞前需要与载体结合，目前经常使用的载体是__________。

(4)基因工程操作的第四步是目的基因的检测与鉴定，其中分子水平的检测又分三步：首先要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，采用的技术是__________；其次还要检测__________，方法同样是采用分子杂交技术；最后检测__________，方法是__________杂交。

（12分）科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄植株的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有Pst I 、Sma I 、Hind III 、Alul 等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（amp^r 为抗氨苄青霉素基因），其中①—④ 是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，I 、II 表示相关结构或细胞。请据图作答：

（l）基因工程的核心是_______________________________。

(2)构建基因表达载体时，可用一种或多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用                 酶，分别对目的基因和质粒进行切割，切割后产生的DNA 片段分别为       种和       种。

（3）要筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞,应首先选择含                      的培养基中筛选番茄组织细胞。

（4）研究人员通常采用                        法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内.

 (5)基因工程操作中的第四步是目的基因的检测与鉴定, 在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质通常采用   __________    技术，。采用   __________ 方法在个体生物学水平上检测目的基因是否表达。

(6)图中③④分别指的是            、           ,欲获得人工种子应培养到___________阶段。将II细胞培养成完整植物体所用技术的理论基础是___________________________。

通过基因工程的方法，科学家采用花粉管通道法将毒蛋白基因转入棉花植株并获得成功表达。棉铃虫吃了这种转基因棉花的植株后就会死亡。花粉管通道法是指：利用植物花粉萌发时形成的花粉管通道将毒蛋白基因送入胚囊，进而导入尚不具备细胞壁的合子或早期胚体细胞中，借助天然的种胚系统，形成含有目的基因的种胚。请回答下列问题：

(1)下列所示的黏性末端是由________种限制性核酸内切酶作用产生的。

(2)利用花粉管通道法将毒蛋白基因导入棉花细胞，此过程是基因工程操作步骤中的第三步，即____________。获取目的基因时，如果基因比较小，核苷酸序列又已知，则可以通过DNA合成仪用化学方法直接________________。

(3)该目的基因在导入受体细胞前需要与载体结合，目前经常使用的载体是__________________。

(4)基因工程操作的第四步是目的基因的检测与鉴定，其中分子水平的检测又分三步：首先要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，采用的技术是______________；其次还要检测__________，方法同样是采用分子杂交技术；最后检测____________，方法是________杂交。

(5)人们对转基因生物安全性的关注，随着转基因成果的不断出现而与日俱增。有人认为转基因生物不会影响食物安全，你的观点呢？理由是什么？

（12分）科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄植株的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有Pst I 、Sma I 、Hind III 、Alul 等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（amp^r为抗氨苄青霉素基因），其中①—④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，I 、II 表示相关结构或细胞。请据图作答：

（l）基因工程的核心是_______________________________。
(2)构建基因表达载体时，可用一种或多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用                酶，分别对目的基因和质粒进行切割，切割后产生的DNA 片段分别为      种和      种。
（3）要筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞,应首先选择含                     的培养基中筛选番茄组织细胞。
（4）研究人员通常采用                       法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内.
(5)基因工程操作中的第四步是目的基因的检测与鉴定,在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质通常采用   __________   技术，。采用   __________ 方法在个体生物学水平上检测目的基因是否表达。
(6)图中③④分别指的是           、           ,欲获得人工种子应培养到___________阶段。将II细胞培养成完整植物体所用技术的理论基础是___________________________。

通过基因工程的方法，科学家采用花粉管通道法将毒蛋白基因转入棉花植株并获得成功表达。棉铃虫吃了这种转基因棉花的植株后就会死亡。花粉管通道法是指：利用植物花粉萌发时形成的花粉管通道将毒蛋白基因送入胚囊，进而导入尚不具备细胞壁的合子或早期胚体细胞中，借助天然的种胚系统，形成含有目的基因的种胚。请回答下列问题：

(1)下列所示的黏性末端是由________种限制性核酸内切酶作用产生的。

(2)利用花粉管通道法将毒蛋白基因导入棉花细胞，此过程是基因工程操作步骤中的第三步，即__________。获取目的基因时，如果基因比较小，核苷酸序列又已知，则可以通过DNA合成仪用化学方法直接__________。

(3)该目的基因在导入受体细胞前需要与载体结合，目前经常使用的载体是________________________________________________________________________。

(4)基因工程操作的第四步是目的基因的检测与鉴定，其中分子水平的检测又分三步：首先要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，采用的技术是_______；其次还要检测________，方法同样是采用分子杂交技术；最后检测_______，方法是______杂交。

(5)人们对转基因生物安全性的关注，随着转基因成果的不断涌现而与日俱增。有人认为转基因生物不会影响食物安全，你的观点呢？理由是什么？ ___________________

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