练习册

  • 练习册
  • 试题
    核酸的分离和提纯 研究核酸首先要对其进行分离和提纯.制备核酸要注意防止核酸的降解和变性.尽量保持其在生物体内的天然状态.早期研究时.由于受到方法上的限制.得到的样品往往是一些降解产物.要制备天然状态的核酸.必须在温和的条件下进行.防止过酸.过碱.避免剧烈搅拌.尤其是防止核酸酶的作用. 真核生物中的染色体DNA与组蛋白结合成核蛋白(DNP).存在于核内.DNP溶于水和浓盐溶液(如质量浓度为1 mol/L的NaCl溶液).但不溶于质量浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液.利用这一性质.可将细胞破碎后用浓盐溶液提取.然后用水稀释至0.14 mol/L.使DNP纤维沉淀出来.缠绕在玻璃棒上.再经多次溶解和沉淀以达到纯化目的.苯酚是很强的蛋白质变性剂.可用苯酚抽提.除去蛋白质.用水饱和的苯酚与DNP一起振荡.冷冻离心.DNA溶于上层水相.不溶性变性蛋白质残留物位于中间界面.一部分变性蛋白质停留在酚相.如此操作反复多次以除净蛋白质.将含DNA的水相合并.在有盐存在的条件下加2倍体积冷的乙醇.可将DNA沉淀出来.再用乙醚和乙醇洗涤沉淀.用这种方法可以得到纯的DNA. RNA比DNA更不稳定.而且RNase又无处不在.因此RNA的分离更为困难.制备RNA通常需要注意3点:(1)所有用于制备RNA的器具必须灭菌,(2)在破碎细胞的同时加入强变性剂使RNase失活,(3)在RNA的反应体系中加入RNase的抑制剂.目前最常用的制备RNA的方法有两种:(1)用酸性盐/苯酚/氯仿抽提.是极强烈的蛋白质变性剂.它几乎使所有遇到的蛋白质都变性.用苯酚和氯仿多次除净蛋白质.此法用于小量制备RNA.(2)用盐/氯化铯将细胞抽提物进行密度梯度离心.蛋白质在最上层.DNA位于中间.RNA沉在底部.此法可制备较大量高纯度的天然RNA.不同功能RNA常分布于细胞的不同部位.分离这些RNA常常先用差速离心法.将细胞核.线粒体.叶绿体.细胞质等各部分分开.再从这些部分中分离出RNA. 【查看更多】

     

    题目列表(包括答案和解析)


    同步练习册答案