14．表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点．请回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	EcoRⅠ	SmaⅠ
识别序列及切割位点	G↓GATCC CCTAG↑G	A↓AGCTT TTCGA↑A	G↓AATTC CTTAA↑G	CCC↓GGG GGG↑CCC

（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有0、2    个游离的磷酸基团．
（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越高．
（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SrnaⅠ切割，原因是SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因．外源DNA中的目的基因．
（4）与只使用EcoR I相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化．
（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入DNA连接 酶．
（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了鉴别和筛选含有目的基因的细胞．

13．能识别特定的DNA序列并进行剪切，不同的限制酶可以对不同的核酸序列进行剪切．现用E、H、P三种不同的限制酶对一段大小6.2kb的线状DNA进行剪切后，用凝胶电泳分离各核酸片段，实验结果如图所示，这3种不同的限制酶在此DNA片段上相应切点的位置是（　　）

E	H	P	E+H	E+P	H+P

	A．			B．
	C．			D．

12．莠去津是一种含氮农药（化学名称：2-氯-4-二乙胺基-6-异丙胺基-1，3，5-三嗪），在土壤中不易降解，为修复被其污染的土壤，可按下面程序选育能降解莠去津的细菌（目的菌）．请据图回答：（已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明）

（1）由图推断，从A瓶到C瓶液体培养的过程称为选择培养，目的是初步选择能降解莠去津的细菌（目的菌）并增加其数量．
（2）在将C瓶菌种接种到固体培养基之前通常要进行梯度稀释，从图中看本实验将菌种接种到固体培养基的方法是稀释涂布平板法．
（3）一段时间后，培养基出现无透明圈和有透明圈两种菌落，我们筛选的目的菌是有透明圈菌落中的细菌，该菌落生长所需的氮元素主要来源于莠去津．
（4）为弄清固体培养基中的非目的菌的菌落来自C瓶菌种还是培养基，应如何设置对照组？配制的培养基灭菌后不接种菌种，与实验组放在相同条件下培养．
（5）某同学计划统计C瓶中“目的菌”的总数，他选用10^-4稀释液进行涂布分离，且设置了3个培养皿的实验组．该同学得到的3个平板的菌落数分别是21、212和256，该同学以这3个平板上菌落平均数作为统计结果．你认为合理吗？不合理．如何解释3个平板上的数据差异？可能在操作过程中出现了错误如某一组实验取菌液太少或涂布不均匀或涂布器未冷却充分杀死了细菌（其他合理答案可给分）．
（6）实验结束后，除了菌种保存外，使用过的培养基及培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散．

11．多环芳烃是具有致癌、致畸、致突变作用的全球性污染物，是煤、石油、有机高分子化合物等有机物不完全燃烧时产生的挥发性碳氢化合物，包括萘、蒽、菲、芘等150余种化合物．某研究小组从一污水处理厂的污泥中筛选到一株可降解萘、蒽的细菌，命名为BDP01．
（1）该研究小组所用的培养基应以萘或蒽作为唯一碳源，其目的是筛选出BDP01菌株，从功能看该培养基类型属于选择培养基．
（2）接种时所用的接种环通过灼烧灭菌，在第二次及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，该分离纯化方法称平板划线法．
（3）下面的图1和图2为该研究小组进行的其中两个实验的实验结果图，菌株的生长量以分光光度计于600nm处测定的光吸收值（OD₆₀₀）表示．

①测定菌株生长量时用液体培养基，并需振荡培养．振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快．分析其原因是：振荡培养能提高培养液中溶氧量的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率．
②由图1可见，菌株生长量较高的温度范围是30～35℃．图2结果表明，BDP01对pH的适应范围较小，在酸性条件下的生长量要小于碱性条件下的．
③结合图2推测，进行图1相关实验时培养基的pH最可能为7.0（用图2中相关数值表示）．
（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定（或分类）．

10．某些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究，人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等．研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能产生纤维素酶的微生物．请分析并回答问题：
（1）培养基中加入的化合物A是纤维素，为微生物的生长提供碳源，这种培养基属于选择培养基．
（2）在筛选纤维素分解菌的过程中，通常用刚果红染色法，这种方法能够通过颜色反应直接对纤维素分解菌进行筛选．甲同学在实验时得到了如上图所示的结果，则纤维素分解菌位于A内．
A．③B．①②C．②③D．①②③
（3）某同学打算从牛胃中分离纤维素分解菌并计数，与分离醋酸菌相比，进行培养时除了营养不同外，最主要的实验条件差别是保证无氧环境，该同学采用活菌计数法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目小（低）．
（4）纤维素酶是一种复合酶，一般包括三种成分：C₁酶、C_X酶和葡萄糖苷酶．前两种酶能使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖．
（5）某同学在提取和分离纤维素酶的过程中，为了保证抵制外界酸和碱对酶活性的影响，采取的措施是向提取液和分离液中添加缓冲溶液；若探究纤维素酶活性的最适温度，如何设置对照？设置不同的温度梯度进行相互对照．
（6）无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染，还能有效避免操作者被微生物感染．

9．近年来，纪录片《舌尖上的中国》引发全民关注美食的热潮，其中多次讲述了利用不同微生物的发酵作用制作的美味食品．请分析回答下列问题：
（1）在果醋制作时，运用醋酸菌在供应氧气和糖源充足时，将糖分解成醋酸；在糖源不充足时，也可以利用酒精生成醋酸，请写出该过程的化学反应式：C₂H₅OH+O₂$\stackrel{酶}{→}$CH₃COOH+H₂O+能量．
（2）腐乳制作的流程是：让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制．用盐腌制时，应注意控制盐的用量；配制卤汤时，要使卤汤中酒的含量控制在12%左右．
（3）制作泡菜的原理是乳酸菌在无氧的环境下大量繁殖，将葡萄糖分解成乳酸．
（4）蔬菜在腌制过程中，会产生亚硝酸盐．在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料．
（5）从开始制作到泡菜质量最佳这段时间内，泡菜液逐渐变酸，这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是乳酸菌数量增多，杂菌数量减少，原因是乳酸菌比杂菌更耐酸．

8．苹果醋具有营养丰富，增强机体免疫力，护肤养肝等多种功效，以鲜苹果汁为原料利用发酵瓶制作果酒和果醋的过程简图如图1，请分析回答：

（1）过程甲中使用的微生物是酵母菌，苹果酒制作过程中，接种完成后要先向发酵罐中通入一段时间的无菌空气，目的是在有氧条件下，使酵母菌迅速繁殖，增加数量．发酵温度控制在18℃～25℃，经过10～12天后，样液中是否产生酒精，可以用（酸性）重铬酸钾溶液来检验．
（2）与醋酸杆菌相比，酵母菌在结构上的主要特点是有成形的细胞核．
（3）某同学尝试自己利用图2装置制果醋，制作过程中充气口应充入空气，排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连，这样做的原因是防止空气中微生物的污染．
（4）若将菌种进行临时保存时，可在低温下使用试管斜面保存，但该方法除保存时间短外，菌种还易被污染或产生变异；若需较长时间保存菌种，可用的方法是甘油管藏．

7．下列关于微生物分离和培养的有关叙述，不正确的是（　　）

	A．	分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度
	B．	测定土壤样品中的活菌数目，常用显微镜直接计数法
	C．	分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一氮源
	D．	对照实验是指除了被测试条件以外，其他条件都相同的实验

6．下列与传统发酵有关的微生物的比较中，不正确的是（　　）

	A	B	C	D
微生物	酵母菌	醋酸菌	毛霉	乳酸菌
生物学分类	真核生物	原核生物	真核生物	原核生物
代谢类型	异养兼性厌氧型	异养需氧型	异养需氧型	异养厌氧型
适宜温度	18～25℃	30～35℃	15～18℃	室温
主要用途	酿酒、发面	酿醋、酸奶	制作腐乳	制作泡菜

A．

A

B．

B

C．

C

D．

D

5．在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验时，需要在酒精灯火焰旁操作的有（　　）
①土壤取样 ②称取土壤 ③稀释土壤溶液 ④涂布平板 ⑤微生物的培养．

A．

①②④

B．

①④⑤

C．

②③⑤

D．

②③④