3．(2012·江苏，32)图①表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，图②表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MpsⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C^↓CGG、G^↓GATCC、^↓GATC、CCC^↓GGG。请回答下列问题：

(1)图①的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由________________________连接。

(2)若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图①中DNA片段，产生的末端是________末端，其产物长度为________________________。

(3)若图①中虚线方框内的碱基对被T—A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图①及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有________种不同长度的DNA片段。

(4)若将图②中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是________。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加________的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。

2．(2012·天津理综)黄曲霉毒素B₁(AFB₁)存在于被黄曲霉菌污染的饲料中，它可以通过食物链进入动物体内并蓄积，引起癌变。某些微生物能表达AFB₁解毒酶，将该酶添加在饮料中可以降解AFB₁，清除其毒性。回答下列问题：

(1)AFB₁属于________类致癌因子。

(2)AFB₁能结合在DNA的G上，使该位点受损伤变为G^*，在DNA复制中，G^*会与A配对。现有受损伤部位的序列为，经两次复制后，该序列突变为________。

(3)下图为采用基因工程技术生产AFB₁解毒酶的流程图。

据图回答问题：

①在甲、乙条件下培养含AFB₁解毒酶基因的菌株，经测定，甲菌液细胞密度小、细胞含解毒酶；乙菌液细胞密度大、细胞不含解毒酶。过程Ⅰ应选择________菌液的细胞提取总RNA，理由是_____________________________________________________________。

②过程Ⅱ中，与引物结合的模板是____________________________________________________________。

③检测酵母工程菌是否合成了AFB₁解毒酶，应采用________方法。

(4)选取不含AFB₁的饲料和某种实验动物为材料，探究该AFB₁解毒酶在饲料中的解毒效果。实验设计及测定结果见下表。

据表回答问题：

①本实验的两个自变量分别为_____________________________。

②本实验中，反映AFB₁解毒酶解毒效果的对照组是________。

③经测定，某污染饲料中AFB₁含量为100 μg/kg，则每千克饲料应添加________克AFB₁解毒酶，解毒效果最好，同时节约了成本。

(5)采用蛋白质工程进一步改造该酶的基本途径是：从提高酶的活性出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的________序列。

1.(2012·浙江理综)天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是(　　)

A．提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因B

B．利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因B

C．利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞

D．将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞

9．科学家通过基因工程方法，将苏云金芽孢杆菌的Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞内，并成功实现了表达，从而培育出了能抗棉铃虫的棉花植株——抗虫棉。其过程大致如图所示：

(1)基因工程的操作程序主要包括的四个步骤是______________、______________、______________、______________。

(2)Ti质粒是农杆菌中的一种质粒，其上有T­DNA，能把目的基因插入Ti质粒的T­DNA中是利用了T­DNA__________________的特点。

(3)Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞中并成功实现表达的过程，在基因工程中称为__________。

(4)将目的基因导入受体细胞的方法有很多种，该题中涉及的是__________。

(5)目的基因能否在棉株体内稳定维持和表达其遗传特性的关键是________________________，这需要通过检测才能知道，检测采用的方法是________________________________________________。

8．(江苏省黄桥中学2012届高三月考)组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造。科学家在体外构建的大肠杆菌的一种质粒只有某限制酶的一个识别序列，位于该质粒的lacZ基因中。lacZ基因若无外源基因插入，便可表达出半乳糖苷酶。当培养基中含有两种物质I和X时，X便会被半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。如果lacZ基因中插入了外源基因，带有该种质粒的大肠杆菌便不能表达半乳糖苷酶，培养基中的X不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落。体外构建的这种大肠杆菌质粒还携带了氨苄青霉素抗性基因。下图是利用lacZ基因的插入失活、筛选出重组质粒的示意图。据图回答下列问题：

(1)作为受体大肠杆菌应______________(填“含有”或“不含”)氨苄青霉素抗性基因，以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。取用氯化钙溶液处理过的受体大肠杆菌，置于试管Ⅱ中，完成基因工程操作的______________________________步骤。

(2)图中的选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入__________________________________等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。

(3)将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果：

①_______________________________________________。

②_______________________________________________。

(4)若改用噬菌体为运载体，科学家分别用³²P、³⁵S标记噬菌体内的目的基因、外壳，在下图中标记元素³²P、³⁵S所在部位依次是________________(填图中标号)。

7．如图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图回答：

(1)在基因工程中，A→B为__________技术，利用的原理是__________，其中①为__________过程。

(2)加热至94 ℃的目的是使DNA中的__________键断裂，这一过程在细胞内是通过__________的作用来完成的。

(3)当温度降低时，引物与模板互补结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板链延伸，最终合成两个DNA分子，此过程中原料是__________，遵循的原则是__________。

(4)目的基因导入绵羊受体细胞常用__________技术。

(5)B→D为抗虫棉的培育过程，其中④过程常用的方法是__________，要确定目的基因(抗虫基因)导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体生物学水平上的鉴定过程：__________。

6．如图为DNA分子的切割和连接过程：

(1)EcoRⅠ是一种__________酶，其识别序列是__________，切割点是__________与__________之间的__________键。切割结果产生的DNA片段末端形式为__________。

(2)不同来源DNA片段结合，在这里需要的酶应是__________连接酶，此酶是通过在__________与__________之间形成__________键，而起“缝合”作用的。还有一种连接平末端的连接酶是__________。

5．(杭州高中2012届月考)下图为重组质粒形成示意图。将此重组质粒导入大肠杆菌，然后将大肠杆菌放在四种培养基中培养：a－无抗生素的培养基，b－含四环素的培养基，c－含氨苄青霉素的培养基，d－含四环素和氨苄青霉素的培养基。含重组质粒的大肠杆菌能生长的是(　　)

A．a　　　　　　　　　    B．a和c

C．a和b                              D．b和c

4．(2011·四川卷)北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强。下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是(　　)

A．过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序

B．将多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白

C．过程②构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选

D．应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达

3．(2011·浙江卷)将ada(腺苷酸脱氨酶基因)通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是(　　)

A．每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒

B．每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点

C．每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada

D．每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子