（2006，上海）农业科技工作者在烟草中找到了一抗病基因，现拟采用基因工程技术将该基因转入棉花，培育抗病棉花品系。请回答下列问题。

（1）要获得该抗病基因，可采用________、________等方法。为了能把该抗病基因转入到棉花细胞中，常用的载体是________。

（2）要使载体与该抗病基因连接，首先应使用________进行切割。假如载体被切割后，得到的分子末端序列为则能与该载体连接的抗病基因分子末端是

[　　]

A．

B．

C．

D．

（3）切割完成后，采用________酶将载体与该抗病基因连接，连接后得到的DNA分子称为________。

（4）再将连接得到的DNA分子导入农杆菌，然后用该农杆菌去________棉花细胞，利用植物细胞具有的________性进行组织培养，从培养出的植株中________出抗病的棉花。

（5）该抗病基因在棉花细胞中表达的产物是

[　　]

（6）转基因棉花获得的________是由该表达产物来体现的。

（2006·江苏）基因工程又叫基因拼接技术。

（1）在该技术中，用人工合成方法获得目的基因的途径之一是：以目的基因转录的________为模板，________成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成________。

（2）基因工程中常用的受体细胞有细菌、真菌、________。若将真核基因在原核细胞中表达，对该目的基因的基本要求是________。

（3）假设以大肠杆菌质粒作为运载体，并以同一种限制性内切酶切割运载体与目的基因，将切割后的运载体与目的基因片段混合，并加入DNA连接酶。连接产物至少有________种环状DNA分子，它们分别是________。

以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段。

你是否能用DNA连接酶将它们连接起来？

实验探究

　　质粒是基因工程中常用的载体，存在于许多细菌及酵母菌等生物中。请根据原理和材料用具，设计实验，选择载体质粒，明确质粒的抗生素基因所控制的抗生素类别。

　　实验原理：作为载体的质粒须有标记基因，这一标记基因可以是抗生素抗性基因，故凡有抗生素抗性的细菌，其质粒可以选作为载体。

　　材料用具：青霉素溶液、10万单位／mL的四环素溶液、菌种、灭菌的含有细菌培养基的培养皿、酒精灯、接种环、一次性注射器、蒸馏水、恒温箱等。

（1）方法步骤：第一步：取三个含细菌培养基的培养皿，编号1、2、3，在酒精灯旁，用三支注射器分别注入1毫升的蒸馏水、青霉素溶液和四环素溶液，并使之在整个培养皿表面均匀分布；

第二步：________________________；

第三步：________________________。

（2）预期结果及结论：

①________________________________________；

②________________________________________；

③________________________________________；

④________________________________________。

（3）设置1号试管的目的是进行________________________。

某同学在做“胡萝卜素的提取”实验时，操作情况如下所述，结果实验失败，请指出错误所在：

（1）将50 g新鲜的胡萝卜进行粉碎后，放入长颈圆底烧瓶中，采用水浴加热萃取。

（2）将提取的胡萝卜素粗品通过层析进行鉴定。点样时，连续迅速地重复2～3次。

（3）将点样完的滤纸条插入层析液中，并不断摇晃，以求加快胡萝卜素在滤纸条上的扩散。

实验室里从海藻中提取碘的流程如下图：

（1）指出制取碘的过程中有关实验的操作名称：①________；②________。

（2）提取碘的过程中，可供选择的有机溶剂是

[　　]

（3）为使海藻灰中碘离子转化为碘的有机溶液，实验室里有烧杯、玻璃棒、集气瓶、酒精灯、导管、圆底烧瓶、石棉网以及必要的夹持仪器、物品，还缺少的玻璃仪器是________________。

（4）从含碘的有机溶液中提取碘和回收有机溶剂，还需要经过蒸馏，观察下图所示的实验装置，指出其中错误之处，并加以改正。

（5）进行上述蒸馏操作时，使用水浴的原因是________________，最后晶态碘在________________里聚集。

Taq DNA聚合酶是从一种耐高温细菌中分离提取的。该菌是1966年从美国黄石国家公园的一个热泉中发现的。实验表明，PCR反应时变性温度为80～100℃，50个循环后，Taq DNA聚合酶仍有65％的活性。Taq DNA聚合酶的热稳定性是该酶用于PCR反应的前提条件，也是PCR反应能迅速发展和广泛应用的原因。Taq DNA聚合酶还具有逆转录活性，其作用类似逆转录酶。Taq DNA聚合酶表现为对依赖，该酶的催化活性对浓度非常敏感。测定结果为浓度在2.0 m mol／L时该酶催化活性最高，此浓度能最大限度地激活Taq DNA聚合酶的活性，浓度过高就会抑制酶活性，因而的浓度在不同的反应体系中应适当调整，优化浓度。Taq DNA聚合酶具有5′→3′聚合酶活性和5′→3′外切酶活性，而无3′→5′外切酶活性，它不具有校正活性。因而在PCR反应中如发生某些碱基的错配，该酶是没有校正功能的。Taq DNA聚合酶的碱基错配概率为2.1×。

（1）Taq DNA聚合酶在高温下仍能保持活性，因此PCR扩增时可以________加入，________（填“需要”或“不需要”）再添加。

（2）影响PCR反应的影响因素除引物、反应温度和时间、TaqDNA聚合酶浓度外，从材料中可知，还应有________________。

（3）这种嗜热细菌能够在热泉中生存，这是________________的结果。

（4）PCR反应中由碱基错配引起的变异属于________________，假设对一个DNA进行扩增，第一次循环时某一模板链上发生碱基错配，则扩增若干次后检测所有DNA的扩增片段与原DNA相应片段相同的占________________。

近10年来PCR技术（多聚酶链式反应）成为分子生物学实验室的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制（如下图所示）。在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。

（1）加热使DNA双链打开，这一步是打开________键，称为________，在细胞中是在________酶的作用下进行的。

（2）当温度降低时，引物与模板末端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最终合成两条DNA分子，此过程中原料是________________，遵循的原则是________________。

（3）PCR技术的必需条件，除了模板、原料、ATP、酶以外，至少还有三个条件，即：液体环境、适宜的________和________。

（4）通过PCR技术使DNA分子大量复制，若将一个用标记的DNA分子放入试管中，以含有的脱氧核苷酸为原料，连续复制4次之后，则标记的DNA分子占全部DNA总数的比例为________。

（5）PCR技术不仅为遗传病的诊断带来了便利，而且改进了检测细菌和病毒的方法．若要检测一个人是否感染了艾滋病，你认为可用PCR技术扩增他血液中的

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样品DNA经PCR技术（聚合酶链式反应）扩增，可以获取大量DNA分子克隆。其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制（如下图）在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。

（1）图中A过程表示________。

（2）某样品DNA中共含3000个碱基对，碱基数量满足：（A＋T）：（G＋C）＝1∶2，现欲得到1000个与样品相同的DNA，至少需要向试管中加入________个腺嘌吟脱氧核苷酸。

（3）“PCR”与人体内DNA复制相比有何特殊之处？

关于DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验结果的比较，最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请据下图回答问题：

（1）鸡血细胞中红细胞________，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中________细胞的数目较多，可以提供丰富的________。

（2）实验前由老师制备血细胞液提供同学们做实验材料，而不用鸡全血，主要原因是________________________。

（3）生活在牧羊区的人们，采取牛羊和马血较方便，若他们按实验要求完成实验步骤后，结果是________________，这是因为这些动物和人类一样________________。但若改用动物的肝脏做实验材料，实验能顺利进行，这是因为________________。

（4）若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加________________程序，使组织细胞更易分离。