Question

【题目】白僵菌可感染农业害虫，常作为防治害虫的菌剂。由于白僵菌对除草剂草丁膦敏感，且杀死害虫的能力较弱，科研人员对其进行基因工程改造，流程如图所示。

（1）苏云金芽孢杆菌产生的毒蛋白，能有效杀死害虫。已知该基因的全部序列，科研人员通过_______法和PCR 技术获得大量毒蛋白基因片段。据图分析，将毒蛋白基因和质粒连接获得重组质粒l的过程需要用到的工具酶是________________________。

（2）重组质粒1 和Bar 基因（草丁膦抗性基因）各自用XbaI 酶处理，得到酶切片段。重组质粒l的酶切片段再用去磷酸化酶处理，使末端游离的磷酸基团脱离，目的是防止____________。将未用去磷酸化酶处理的Bar 基因与重组质粒l 连接，获得重组质粒2。获得的重组质粒2 的是下图中的____________。

（3）将重组质粒2 与感受态的白僵菌菌液混合进行转化，重组质粒2 在白僵菌细胞内被修复。 一段时间后用含有___________的平板培养基进行筛选，获得含有Bar基因的重组白僵菌。

（4）提取上述重组白僵菌全部mRNA，加入___________酶，获得cDNA，再加入毒蛋白基 因引物进行PCR 反应，用以检测毒蛋白基因是否完成了___________。

（5）科研人员将重组白僵菌喷涂于植物叶片上，以此饲喂饥饿处理的害虫，记录单位时间内的_________，以判断重组白僵菌的杀虫效果。

Answer 1

【答案】 人工合成（或“化学合成”） Nco I、 BamH I 和DNA 连接酶 重组质粒1 酶切片段自身连接（或“相互连接”） C 草丁膦 逆转录 转录 死亡害虫数

【解析】试题分析：

（1）已知基因的全部序列，可以通过化学合成法和PCR技术获得大量毒蛋白基因片段。将毒蛋白基因和质粒连接获得重组质粒l的过程需要用到的工具酶是NcoI、BamHI和DNA连接酶。

（2）将重组质粒l的酶切片段再用去磷酸化酶处理，使末端游离的磷酸基团脱离，目的是防止重组质粒1自身环化。由于重组质粒1的两条链的5’端的磷酸去掉，获得的重组质粒2的两条链均不能完全闭合，如图中的C。

（3）用含有草丁膦的平板培养基进行筛选，获得对草丁膦有抗性的含有Bar基因的重组白僵菌。

（4）提取上述重组白僵菌全部mRNA，加入逆转录酶，获得cDNA，再加入毒蛋白基因引物进行PCR反应，用以检测毒蛋白基因是否完成转录。

（5）科研人员将重组白僵菌喷涂于植物叶片上，以此饲喂饥饿处理的害虫，记录单位时间内的害虫死亡数量，以判断重组白僵菌的杀虫效果。