Question

【题目】动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础，请回答下列有关动物细胞培养的问题：

（1）在培养瓶中进行动物细胞培养时，需两次用到胰蛋白酶，第一次使用的目的是将组织分散成单个细胞，由于动物细胞培养具有_____、______现象，因此需第二次用该酶处理，然后分瓶培养。在培养过程中，应定期更换培养液，目的是__________________。

（2）细胞正常培养了一段时间后，发现细胞绝大部分死亡，只有极少数细胞存活，这是因为存活的细胞发生了__________，可无限增殖。目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为___代以内的细胞，以保持细胞正常的______核型。

（3）在单克隆抗体制备过程中，将获得__________(答出两个特点)的杂交瘤细胞进行______培养和抗体检测以后，再经过多次筛选，可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞，将这些细胞在体外做大规模培养或注入小鼠腹腔内增殖，从_______或_______中就可获得大量的单克隆抗体。

Answer 1

【答案】贴壁生长 接触抑制 清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害 突变 10 二倍体 既能产生特异性抗体，又能无限增殖 克隆化 细胞培养液 小鼠腹水

【解析】

1、动物细胞培养的流程:取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织) →剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。

2、动物培养条件：

（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌②添加一定量的抗生素③定期更换培养液，以清除代谢废物。

（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质。

（3）温度和PH。

（4）气体环境：95%空气(细胞代谢必需的)和5%的CO2 (维持培养液的PH)。

单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取效应B细胞，将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体。

（1）由于正常动物细胞具有贴壁生长和接触抑制的特点，故培养到一定阶段需要第二次用胰蛋白酶处理，然后分瓶培养。在培养过程中，需要清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，故需要定期更换培养液。

（2）细胞正常培养一段时间后，大部分死亡，极少数细胞存活，少数存活的细胞朝向癌细胞的方向发生了突变，可无限增殖。目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内的细胞，以保持细胞正常的二倍体核型。

（3）在单克隆抗体制备过程中，将获得既能产生特异性抗体，又能无限增殖的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测以后，再经过多次筛选，可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞，将这些细胞在体外做大规模培养或注入小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液和小鼠腹水中就可获得大量的单克隆抗体。