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    【题目】为制备目的基因Y（图1）与质粒X（图2）的重组DNA，将质粒X与含Y的DNA片段加入含有限制性核酸内切酶BgⅠⅡ与BamHⅠ的反应混合物中，酶切后的片段再加入含有连接酶的反应体系中．其中，质粒X含有leu2基因，可用于合成亮氨酸，目的基因Y含有卡那霉素抗性基因KanR。

    （1）根据图3分别写出BgⅠⅡ与BamHⅠ酶切后形成的末端序列：_____、_____。

    （2）BgⅠⅡ酶切后的质粒与BamHⅠ酶切后的目的基因Y能够连接的原因是_____。

    将连接后的产物转化入一种Z细菌，Z细菌对卡那霉素敏感，且不能在缺乏亮氨酸的培养基中培养。

    （3）使用BgⅠⅡ处理重组质粒，可以得到_____。

    A．长度为3300bp的环状DNA

    B．长度为3300bp的线形DNA

    C．长度为2800bp和500bp的线形DNA

    D．长度为2800bp的环状DNA

    （4）要筛选含有重组质粒的Z细胞，应选择_____。

    A．卡那霉素和亮氨酸均含的培养基

    B．卡那霉素和亮氨酸均不含的培养基

    C．含卡那霉素但不含亮氨酸的培养基

    D．含亮氨酸但不含卡那霉素的培养基

    【答案】 酶切后产生相同的黏性末端，并遵循碱基互补配对原则 A C

    【解析】

    基因工程技术的基本步骤：

    （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

    （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

    （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样.将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

    （4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术.个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

    （1）限制酶BgⅠⅡ与BamHⅠ的识别序列及切割位点如图：

    ，

    因此它们切割形成的末端序列依次为：

    、。

    （2）BgⅠⅡ酶切后的质粒与BamHⅠ酶切后的目的基因Y具有相同的黏性末端，根据碱基互补配对原则，它们能够连接形成重组DNA。

    （3）BgⅠⅡ酶切后的质粒与BamHⅠ酶切后的目的基因形成的重组DNA分子上没有BgⅠⅡ酶的识别序列，因此使用BgⅠⅡ处理重组质粒，可以得到长度为3300bp的环状DNA。

    （4）由于质粒X含有leu2基因，可用于合成亮氨酸，目的基因Y含有卡那霉素抗性基因KanR，因此要筛选含有重组质粒的Z细胞，应选择含卡那霉素但不含亮氨酸的培养基。

    练习册系列答案
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    选项

    图示内容

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    乙

    丙

    A

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    消费者

    CO2库

    生产者

    B

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    血浆

    淋巴

    组织液

    C

    生态系统的能量流向

    生产者

    消费者

    分解者

    D

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