Question

【题目】乙型脑炎和伪狂犬病是猪的两种常见传染病。下图是利用基因工程技术生产能同时预防这两种病疫苗的流程图，其中PrM为乙型脑炎的特异性抗原基因，PK、gG、gD为伪狂犬病的主要抗原基因，TK为伪狂犬病的毒性基因，pgG为启动子，BamHⅠ和EcoRⅠ为两种限制酶，其识别序列及切割位点分别是G↓GATCC、G↓AATTC。请回答下列问题：

（1）过程①所需的酶有 __________和_________。下列四种引物中适用于过程①的一对引物是________。

P1：5'TTGGATCCATGGAAGGCTCAATCATGTG3’

P2：5'CACAAGCTTAGATGACGTATCCAAGGAG3’

P3：5'TACGGTACCTTAGGGGTTAAGTGGG3’

P4：5’GCGAATTCTAACTGTAAGCCGGAGCG3’

（2）过程②所需的酶有___________。过程③中要用Ca2+处理大肠杆菌，其目的是___________。

（3）重组伪狂犬病毒中不带TK基因的优点是_______________。

（4）将获得的病毒疫苗注射到猪体内，一方面病毒中抗原基因在猪细胞中大量表达，诱导猪获得_______免疫；另一方面______________，使得病毒投苗具有用量小、作用更持久等优点。

Answer 1

【答案】 反(逆)转录酶 Taq酶 P1和P4 限制酶和DNA连接酶 使大肠杆菌成为感受态细胞 不具毒性，注射后不会引发猪患病 体液和细胞(特异性） 病毒在动物体内可增殖并长期保留

【解析】试题分析：据图分析，过程①表示乙脑病毒的RNA逆转录形成相应的目的基因，并通过PCR技术扩增该目的基因；过程②表示构建基因表达载体；过程③表示将重组DNA导入受体细胞（大肠杆菌）的过程。

（1）根据以上分析已知，过程①涉及到逆转录和PCR技术，因此需要逆转录和耐高温聚合酶（Taq酶）的催化。根据目的基因两侧的限制酶（BamHⅠ和EcoRⅠ）的识别序列可知，应该选择的引物是P1和P4。

（2）根据以上分析已知，过程②表示构建基因表达载体，需要的工具有限制酶和DNA连接酶；过程③表示将重组DNA导入受体细胞（大肠杆菌）的过程，需要用Ca2+处理大肠杆菌，使得大肠杆菌成为感受态细胞，有利于存在DNA的导入。

（3）根据题干信息已知，TK为伪狂犬病的毒性基因，因此重组伪狂犬病毒中不带TK基因的优点是不具毒性，注射后不会引发猪患病。

（4）将获得的病毒疫苗注射到猪体内，一方面病毒中抗原基因在猪细胞中大量表达，诱导猪获得体液免疫和细胞免疫；另一方面病毒在动物体内可增殖并长期保留，使得病毒投苗具有用量小、作用更持久等优点。