Question

【题目】研究人员利用生物工程技术，探究猪bmp15基因在不同组织细胞中的特异性表达．该工程技术基本流程如图（EGFP基因控制合成增强型绿色荧光蛋白；过程②表示表达载体2成功导入各组织细胞）．请回答：
（1）过程①中，需利用限制酶处理表达载体1．为了大量获得猪bmp基因，可用技术，该技术需要用到的酶是 ．
（2）目前对动物细胞培养所需的营养条件还没完全研究清楚，培养受体细胞时往往需要添加等天然成分．同时还需在培养液中添加一定量的 ， 以防污染．
（3）在实验结果的基础上，提取上述猪肌肉细胞的（mRNA/DNA），利用标记的EGFP基因作探针，进行分子杂交，可进一步探究猪bmp基因特异性表达的原因．
（4）据实验结果推测，猪bmp15基因在细胞特异性表达．

Answer 1

【答案】
（1）XhoI和HindⅢPCR；热稳定；DNA聚合酶（Taq）
（2）血清、血浆；抗生素
（3）mRNA
（4）猪卵巣细胞
【解析】解：（1）据图示可知，切割目的基因时使用的限制酶XhoⅠ和HindⅢ，构建基因表达载体时，需用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，因此过程①中，需利用XhoⅠ和HindⅢ限制酶处理表达载体1．PCR技术可在体外大量扩增目的基因，该技术是在较高温度下进行的，因此需要用到热稳定DNA聚合酶．（2）动物细胞培养时，对动物细胞培养所需的营养条件还没完全研究清楚，因此需要在培养基中加入动物血清；培养受体细胞时，通常需在培养液中添加一定量的抗生素，以防杂菌污染．（3）检测目的基因是否转录出了mRNA，使用分子杂交技术．因此，为了进一步探究猪bmp基因特异性表达的原因，可以提取上述猪肌肉细胞的mRNA利用标记的EGFP基因作探针，进行分子杂交．（4）据实验结果，只有在猪卵巢细胞中检测出绿色荧光，而猪肌肉细胞核猪羊水干细胞中均没有检测出绿色荧光，由此推测猪bmp15基因在猪卵巢细胞中特异性表达． 所以答案是：（1）XhoI和HindⅢPCR；热稳定；DNA聚合酶（Taq）；（2）血清、血浆； 抗生素；（3）mRNA；（4）猪卵巣细胞
【考点精析】根据题目的已知条件，利用基因工程的原理及技术的相关知识可以得到问题的答案，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术．