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    【题目】某化工厂的污水池中含有一种有害的、难以降解的有机化合物A，研究人员利用以下两种方法获得了能高效降解化合物A的细菌．
    （1）Ⅰ方法一：研究人员利用有机化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基成功筛选到能高效降解化合物A的细菌．实验的主要步骤如图所示，请分析回答：
    ①培养基中加入化合物A的目的是 ．
    ②“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的 ． 实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是 ．
    ③在上述实验操作过程中，获得纯净“目的菌”的关键是 ．
    ④转为固体培养时，常采用的方法接种，获得单菌落后继续筛选．
    ⑤若研究“目的菌”的群体生长规律，将单个菌落进行液体培养，可采用显微直接计数法进行计数．若以一个大方格（体积为0.4mm3）有25个中方格的计数板为例进行计算，设五个中方格中总菌数为B，菌液稀释倍数为C，那么原菌液的菌群密度为个/mL．
    （2）Ⅱ方法二：研究人员通过化学方法合成了高效降解化合物A的某种酶的基因，利用PCR扩增后，采用一定方法导入细菌细胞中，经筛选、培养获得高效降解化合物A的细菌．请分析回答： ①在利用PCR扩增该酶的基因时，在扩增缓冲液中添加4种脱氧核苷三磷酸作为原料而不是脱氧核苷酸，从而使反应体系不需要再加入ATP提供能量，请推测PCR反应合成DNA子链时能量来源于 ．
    ②假如PCR反应所用的引物含有放射性、模板不具有放射性，且引物不被切除，则经过n次循环，具有放射性的脱氧核苷酸链占总链数的比值为 ．

    【答案】
    （1）筛选目的菌；化合物A；异养需氧型；防止外来杂菌入侵；平板划线；12500B?C
    （2）所用原料水解产生相应脱氧核苷酸时所释放的能量；
    【解析】解：（1）Ⅰ①由题意可知，本实验是分离出能降解有机化合物A的菌种，所以培养基中加入化合物A的目的是筛选能降解有机化合物A的菌种．②根据培养基成分可知，“化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素”，其中磷酸盐、镁盐以及微量元素均属于无机盐，因此有机化合物A为目的菌提供了生长所需的氮和碳源．实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是异养需氧型．③微生物的培养过程中，获得纯净“目的菌”的关键是防止外来杂菌入侵．④转为固体培养时，常采用平板划线的方法接种，获得单菌落后继续筛选．⑤由题意可知，一个大方格内的菌种数量是B÷5×25=5B，换算成每毫升的菌种数目应是5B÷0.4×1000×C=12500BC个/mL．（2）Ⅱ①根据题意可知，在利用PCR扩增该酶的基因时，在扩增缓冲液中添加4种脱氧核苷三磷酸，从而使反应体系不需要再加入ATP提供能量，由此可以推测PCR反应合成DNA子链时能量来源于脱氧核苷三磷酸水解产生相应脱氧核苷酸时所释放的能量．②假如PCR反应所用的引物含有放射性、模板不具有放射性，且引物不被切除，则经过n次循环，产生2n个DNA分子，即脱氧核苷酸链有2n+1条，其中只有两条母链不含有放射性，因此具有放射性的脱氧核苷酸链占总链数的比值= = ．

    所以答案是：（1）Ⅰ①筛选目的菌②化合物A；异养需氧型③防止外来杂菌入侵④平板划线⑤12500BC（2）Ⅱ①所用原料水解产生相应脱氧核苷酸时所释放的能量②

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