[题目]为培育含油量高的油菜.研究人员尝试利用基因工程等技术获得了转基因油菜品种.回答问题:(1)研究人员依据基因的已知序列设计引物.采用PCR技术从陆地棉基因文库中获取酶D基因.从拟南芥基因中获取转运肽基因.所含限制酶(Cla I.Sac I.Xba I)的酶切位点如图甲所示.若用和酶处理酶D基因和转运肽基因后.可得到A端与端相连的重组基因.(2)� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

【题目】为培育含油量高的油菜，研究人员尝试利用基因工程等技术获得了转基因油菜品种。回答问题：

（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用PCR技术从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因中获取转运肽基因，所含限制酶（Cla I、Sac I、Xba I）的酶切位点如图甲所示。

若用______________和______________酶处理酶D基因和转运肽基因后，可得到A端与______________端（填图中字母）相连的重组基因。

（2）将上述重组基因进一步处理，插入图乙所示T质粒的T-DNA中，T-DNA上有______________限制酶切位点，构建______________并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含______________的固体平板上培养得到含重组基因的单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的侵染液。

（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是______________，进一步筛选后获得转基因油菜细胞，该细胞通过______________技术，可培育成转基因油菜植株，其主要原理是____________。

【答案】ClaⅠ DNA连接 D SacⅠ、XbaⅠ 基因表达载体四环素利用农杆菌将重组基因导入油菜细胞植物组织培养植物细胞的全能性

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

2.植物组织培养的大致过程是：在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下来，放在适当的人工培养基上进行培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。不过这种组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞，叫做愈伤组织。再适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。该过程的原理是植物细胞的全能性。

（1）由图示的酶D基因和转运肽基因两端的限制酶切位点可知，两种基因两端都有限制酶ClaⅠ的酶切位点，因此可用ClaⅠ酶和DNA连接酶处理酶D基因和转运肽基因后，可将酶D基因A端与转运肽基因的D 端相连的重组基因。

（2）要将上述经过进一步处理重组基因，插入图乙所示T质粒的T-DNA中，则需要T-DNA上有SacⅠ、XbaⅠ限制酶切位点，经过限制酶和DNA连接酶处理后，获得目的基因表达载体并将其导入农杆菌中。由于重组质粒中含有抗四环素的基因，因此可将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上筛选并培养得到含重组基因的单菌落，然后将获得的目标菌种进行大量培养。

（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，侵染液中有带有目的基因的农杆菌，从而实现利用农杆菌将重组基因导入油菜细胞的目的，然后再筛选出成功转化的油菜细胞，对含有目的基因的油菜细胞利用植物组织培养技术，培育成转基因油菜植株，利用植物组织培养技术成功获得转基因植株的理论基础是植物细胞的全能性。

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