Question

【题目】回答下列（一）、（二）小题：

（一）回答以菊花茎段为材料进行组织培养的有关问题：

（1）在配制MS培养基时，通常先将各种药品配制成浓度为配方5~10倍的__________，这样配制的主要优点是__________（A 便于低温保存 B 延长使用时间 C 降低称量误差 D 减少杂菌污染）。从培养基的作用看，在MS培养基中定量添加BA和NAA后的培养基属于___________培养基。

（2）从自然界中获取的菊花茎段，须先用70%乙醇等进行消毒，最后用__________进行清洗。将茎段插入培养基的过程须在______中的酒精灯火焰旁进行，以保证无菌环境。

（3）从带芽的茎段上长出丛状苗____________（填“需要”或“不需要”）经历脱分化，长出的丛状苗需__________后，再转入培养基中继续培养。

（4）实验中选用BA和NAA而不用植物中存在的天然激素的原因是_____________________。

（二）腺病毒能引起人呼吸系统不适等症状，但致死率低。研究发现该病毒可作为基因工程的载体。陈薇等科学家研发了以人5型腺病毒（Ad5）为载体的重组新冠疫苗，这是国内第一个进入临床试验阶段的新冠疫苗。腺病毒载体疫苗生产过程示意图如下：

回答下列问题：

（1）在制备人肾上皮细胞系（293细胞）时，发现培养一段时间，细胞铺满培养瓶后不再分裂，这种现象称为__________。出现此现象后，需用__________处理，得到细胞悬液，再进行__________培养，以获得更多的293细胞。

（2）新冠病毒为RNA病毒，其遗传物质不能直接拼接到质粒上，因此在制备以上疫苗时需先通过___________过程获得相应的DNA。构建重组腺病毒穿梭质粒，可使用双酶切法，使之产生__________的粘性末端，以提高目的基因与质粒重组的成功率。据图可知需将___________导入293细胞，从而获得转基因腺病毒。

（3）检测转基因腺病毒携带的目的基因是否在人体细胞内表达，可检测细胞内是否含有相应的__________或抗原分子，若检测抗原分子可用__________技术获得特异性探针。

Answer 1

【答案】母液 C 发芽（生芽） 无菌水 超净台 不需要 分株 BA和NAA是人工合成激素，植物没有相关分解酶，作用时间长，效果明显 接触抑制 胰蛋白酶 传代 逆转录 不同 重组腺病毒穿梭质粒和辅助质粒 mRNA 单克隆抗体制备

【解析】

1、植物组织培养的过程：离体的植物组织、器官或细胞（外植体）脱分化形成愈伤组织，再分化形成胚状体，最后长出完整植株（新植体）。

2、植物组织培养的条件：①细胞离体和适宜的外界条件（如适宜温度、适时的光照、pH和无菌环境等）；②一定的营养（无机、有机成分）和植物激素（生长素和细胞分裂素）。决定植物脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例，特别是生长素和细胞分裂素的协同作用在组织培养过程中非常重要，被称为“激素杠杆”。

3、动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。

4、基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（一）（1）MS培养基由大量元素、微量元素和有机成分组成，也可将大量元素、微量元素和有机成分分别配制成浓度为配方的5~10倍的母液，用时稀释，这样配制的主要优点是降低称量误差（即C）。MS培养基中定量添加BA和NAA后的培养基属于发芽培养基，MS培养基中定量添加NAA后的培养基属于生根培养基。

（2）从自然界中获取的菊花茎段，须先用70%乙醇等进行消毒，再放入5%次氯酸钠溶液浸泡，然后用另一5%次氯酸钠溶液浸泡，最后在超净台中用无菌水清洗，将茎的切断培养在生芽培养基中。

（3）从带芽的茎段上长出丛状苗不需要经历脱分化，长出的丛状苗需要分株后，再转入生根培养基中继续培养。

（4）实验中使用的是人工合成的BA和NAA，是由于植物没有相关分解酶，作用时间长，效果明显。

（二）（1）细胞铺满瓶壁时，会出现接触抑制现象，此时需要胰蛋白酶处理，得到细胞悬液，再进行传代培养，已获得更多的细胞。

（2）新冠病毒是单链的RNA病毒，而质粒是双链的DNA，因此需要将RNA通过逆转录得到相应的DNA才能拼接到质粒上。构建重组腺病毒穿梭质粒，使用双酶切法产生不同的粘性末端，这样可以避免目的基因和质粒自身连接以及目的基因和质粒反向连接，提高目的基因与质粒重组的成功率。据图可知需将重组腺病毒穿梭质粒和辅助质粒导入受体细胞293细胞内。

（3）基因的表达包括转录和翻译两个过程，因此检测目的基因是否在人体细胞内表达，可检测细胞内是否含有相应的mRNA或抗原分子，检测抗原分子的方法是抗原-抗体杂交法，可用单克隆抗体制备技术获得特异性探针。