Question

【题目】Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图（图中数字序号表示的是相关过程）。请回答：

（1）过程①将进行培养的上皮细胞注入去核的卵母细胞中，接受细胞核的卵母细胞应处于___________时期；过程②利用的技术是____________，当重组胚胎培养到囊胚期时，可从其____________分离出ES细胞，ES细胞在功能上具有_______________________的特点。

（2）过程③中获取的目的基因是____________，若要将目的基因导入受体细胞，需要构建____________，构建之前可以根据____________设计引物，利用PCR技术对目的基因进行扩增。为了检测ES细胞的DNA上是否插入了干扰素基因，可采用____________技术。

（3）按此方法和图示技术流程，完成Rag2基因缺失小鼠的基因治疗涉及的多种酶，其中有（3种）____________和耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）等。测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用____________进行杂交实验。

Answer 1

【答案】MⅡ中 早期胚胎培养 内细胞团 发育的全能性 Rag2基因 含Rag2基因的基因表达载体 Rag2基因的脱氧核苷酸序列（或碱基对序列或遗传信息） DNA分子杂交 限制性核酸内切酶、DNA连接酶和胰蛋白酶 抗Rag2蛋白的抗体

【解析】

过程①为核移植，用处于MⅡ中期去核的卵母细胞作为受体细胞，因为其体积大、易操作，营养物质丰富，细胞质中含有促进细胞核全能性表达的物质。过程②为早期胚胎培养，ES细胞取自囊胚的内细胞团或早期胚胎的原始性腺。基因工程基本操作顺序：目的基因获取，表达载体的构建，将目的基因导入受体细胞，目的基因的检测与鉴定。目的基因的检测与鉴定方法：导入检测用DNA分子杂交技术，转录检测用分子杂交技术，翻译检测用抗原——抗体杂交法。

（1）用处于MⅡ中期去核的卵母细胞作为受体细胞，因为它的细胞质中含有促进细胞核全能性表达的物质，有利于重组细胞的发育。过程②为早期胚胎培养，当重组胚胎培养到囊胚期时，可从其内细胞团分离出ES细胞，ES细胞在功能上具有全能性。

（2）过程③中获取的目的基因是Rag2基因，要将目的基因导入受体细胞，需要构建含Rag2基因的基因表达载体，构建之前可以根据Rag2基因的脱氧核苷酸序列设计引物，利用PCR技术对目的基因进行扩增。为了检测ES细胞的DNA上是否插入了干扰素基因，可采用DNA分子杂交技术检测。

（3）基因重组技术需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶，细胞培养需要胰蛋白酶。测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。