Question

【题目】白细胞介素是人体重要的淋巴因子，具有免疫调节、抑制肿瘤等多种功能。近年来科学家将药用蛋白转向植物生产，如图是将人的白细胞介素基因导入马铃薯中，培养生产白细胞介素的过程。（tsr为一种抗生素—硫链丝菌素的抗性基因）

（1）提取人的白细胞介素基因适宜选用的限制酶是___________，不能使用限制酶SmaI的原因是___________。

（2）除图示方法外，也可从利用___________法构建的cDNA文库中获取目的基因。获得目的基因后可采用PCR技术大量扩增，需提供Taq酶和___________等。

（3）将目的基因导入马铃薯细胞常采用___________法，其原理是将目的基因导入Ti质粒上的___________。

（4）为筛选出含目的基因的马铃薯细胞，需要在培养基中添加___________。最终为了检测目的基因是否在马铃薯中表达，可通过____________方法进行分子水平的检测。

Answer 1

【答案】PstⅠ和HindⅢ 限制酶SmaⅠ酶切位点位于白细胞介素基因中部，使用它会造成目的基因断裂 反转录 引物 农杆菌转化 T-DNA 硫链丝菌素 抗原—抗体杂交

【解析】

分析题图，图示表示人的白细胞介素基因表达载体的构建过程，载体和目的基因都有限制酶PstⅠ和HindⅢ的切割位点，所以切割载体和目的基因时用限制酶PstⅠ和HindⅢ，再用DNA连接酶连接目的基因和运载体形成重组载体。获取目的基因的方法包括从基因文库中获取、cDNA文库法、供体细胞的DNA中直接分离基因（鸟枪法）。农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将Ti质粒的T-DNA插入到植物基因组中。

（1）载体和目的基因都有限制酶PstⅠ和HindⅢ的切割位点，使用限制酶SmaI则会破坏目的基因；

（2）目的基因的获取可以采用cDNA文库法（即逆转录法），指以某生物成熟mRNA为模板逆转录而成的cDNA序列的重组DNA群体，采用PCR技术大量扩增，需提供Taq酶和引物等；

（3）将目的基因导入植物细胞常采用农杆菌转化法，利用的是Ti质粒上的T-DNA；

（4）构建好的表达载体含有硫链丝菌素的抗性基因，因此可以在培养基中添加硫链丝菌素进行筛选，为检测目的基因是否顺利表达，可以通过抗原-抗体杂交技术。