Question

【题目】【生物——选修3:现代生物科技专题】为增加油菜种子的含油量，科研人员将转运肽基因与酶D基因相连，导人油菜细胞并获得了转基因油菜品种。

（1）研究人采用PCR技术获取酶D基因和转运肽基因，该技术是利用 的原理，使相应基因呈指数增加。所含三种限制酶（XbaI、ClaI、SacI）的切点如图所示，则用 和

（2）将上述融合基因插人上图所示Ti质粒的 中，构建基因表达载体并导人农杆菌中。为了获得含融合基因的单菌落，应进行的操作是 。随后再利用液体培养基将该单菌落振荡培养，可以得到用于转化的侵染液。

（3）剪取油菜的叶片放人侵染液中一段时间，此过程的目的是 ，进一步筛选后获得转基因油菜细胞，依据 的原理，可将其培育成转基因油菜植株。

（4）用 法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达。

Answer 1

【答案】（1）DNA双链复制 ClaⅠ DNA连接

（2）T-DNA（1分） 将获得的农杆菌接种在含四环素的固体培养基上培养

（3）利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞 细胞具有全能性

（4）抗原—抗体杂交

【解析】（1）PCR技术的原理是DNA双链复制。提取转运肽基因需要XbaI和ClaI，提取酶D基因需要ClaI和SacI，其中由ClaI切割形成的基因末端是相同的，故用ClaⅠ和DNA连接酶处理两个基因后，可得到两基因相连的融合基因。

（2）利用农杆菌转化法导入目的基因，需要将目的基因插入农杆菌的Ti质粒的T-DNA中，所以构建基因表达载体需要将上述的融合基因插入Ti质粒的T-DNA中。重组Ti质粒上面有四环素抗性基因，所以筛选含有融合基因的单菌落需要将获得的农杆菌接种在含四环素的固体培养基上培养。

（3）剪取油菜的叶片放人侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞。进一步筛选后获得转基因油菜细胞植物组织培养技术培育成转基因油菜植株，该过程依据的原理是植物细胞具有全能性。

（4）基因表达的产物是蛋白质，故用抗原—抗体杂交法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达。