【题目】人类是乙型肝炎病毒的唯一宿主，接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。下图为“转基因酵母乙肝疫苗”的生产过程示意图，该过程所用酵母菌为毕赤酵母菌，其体内无天然质粒，科学家改造出了下图所示的pPIC9K质粒（松弛控制型，复制不受宿主细胞控制）用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合与染色体组已实现表达。请回答下列问题：
（1）如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上限制酶_________的识别序列，这样设计的优点是可避免质粒和目的基因的自身环化。步骤1应选用___________（填“Ecoli”或“T4”）DNA连接酶。
（2）步骤2的目的是______________________。已知大肠杆菌每20分钟分裂一次，若1个大肠杆菌中导入了 10个重组质粒，则1小时后可从1个大肠杆菌的后代中得到重组质粒的个数___________。
（3）步骤4中应选用限制酶___________切割重组质粒以获得一段线性DNA，然后将其导入毕赤酵母菌细胞。为了确认毕赤酵母菌转化是否成功，应在培养基中加入___________以便筛选。除此以外，还可以用分子杂交技术鉴定上图中的毕赤酵母菌转化是否成功，过程如下图所示:
根据图中显示结果推算，若要获得16个成功导入该基因的酵母菌菌落，则上图中的酵母菌菌落数至少要为___________个。
（4）已知质粒在细胞传代过程中有丢失现象，试分析毕赤酵母表达系统的遗传稳定性高于大肠杆菌表达系统的主要原因_________________________________。
【答案】 SnaBr和AvrⅡ T4 获得大量重组质粒（扩增） 不确定 BglⅡ 卡拉霉素 120 目的基因整合到酵母染色体上，不易丢失
【解析】试题分析：重组质粒上的目的基因若要表达，需要目的基因的首尾含有启动子和终止子。分析题图，图中质粒含有SnaBⅠ、AvrⅡ、BglⅡ和SacⅠ限制酶切割位点，其中SacⅠ位于启动子上，BglⅡ不在启动子与终止子之间，因此要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，同时防止自身环化，只能用限制酶SnaBⅠ和AvrⅡ切割质粒，则应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上SnaBⅠ和AvrⅡ限制酶的识别序列。
（1）根据以上分析已知，在HBsAg基因两侧的A和B位置接上SnaBⅠ和AvrⅡ限制酶的识别序列；根据表格分析可知，SnaBⅠ和AvrⅡ限制酶切割后漏出的分别是平末端和粘性末端，因此步骤1构建基因表达载体时，应该用T4 DNA连接酶。
（2）步骤2将重组质粒导入大肠杆菌，让其在大肠杆菌体内复制，以获得大量的重组质粒。已知大肠杆菌中导入了10个重组质粒，且20分钟分裂一次，但是不能确定细胞分裂过程中重组质粒是否都复制，且是否平均分配到子细胞中去，因此不能确定1小时后可从1个大肠杆菌的后代中得到重组质粒的个数。
（3）根据链状DNA两端的箭头和图纹可知，切割其的限制酶是BglⅡ；切割后仍然具有卡拉霉素抗性基因，但是丢失了氨苄青霉素抗性基因，因此为了确认毕赤酵母菌转化是否成功，应在培养基中加入卡拉霉素以便筛选。根据图形分析可知，15个酵母菌中有2个是毕转化成功的赤酵母菌，因此若要获得16个成功导入该基因的酵母菌菌落，则上图中的酵母菌菌落数至少要为15÷2×16=120个。
（4）已知质粒在细胞传代过程中有丢失现象，而毕赤酵母表达系统的遗传稳定性高于大肠杆菌表达系统，说明目的基因整合到了酵母染色体上，不易丢失。
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【题目】下列关于细胞分化的叙述，正确的是（ ）
A. 细胞分化只发生在胚胎期
B. 不同的细胞中，mRNA完全不同
C. 细胞分化过程中，细胞内的DNA会发生改变
D. 细胞分化是基因选择性表达的结果
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【题目】下列对生物细胞代谢活动的描述，不正确的是( )
A. 大肠杆菌在拟核区转录信使RNA
B. 乳酸杆菌在细胞质基质中产乳酸
C. 衣藻进行光合作用的场所是叶绿体
D. 酵母菌的高尔基体负责合成蛋白质
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【题目】细胞周期按时间顺序可分为四个时期:G1、S、G2和M期，如图甲所示，各时期所发生的主要生理变化及部分调控因子如下表。请回答下列问题：
时期 | 主要生理变化 | 部分调控因子 |
G1 | 为遗传物质DNA的合成作准备 | CDK4 CDK2（G1/S 转换） |
S | DNA合成 | CDK2 |
G2 | 主要完成蛋白质的合成，为进入分裂期作准备 | CDK1（G2/M 转换） |
M | 核膜消失，染色体等发生变化 | CDK1 |
G0 | 静息状态，细胞不生长，也不分化 | |
（1）DNA聚合酶作用于细胞周期的___________期（填字母），纺锤体形成于___________期（填字母）调控因子___________的表达量增多，促进细胞周期从G1期向S期过渡。
（2）G1期如果缺少某些必需的营养成分（如必需氨基酸），细胞会终止其G1期的进程，进入________期（填字母），一旦补充了所缺少的成分后，细胞将回到G1期，这种调节的意义是可以避免___________。
（3）若图甲中的1、2、3、4为一个细胞周期中的部分检查点，在DNA发生损伤时有阻滞细胞周期的作用。当DNA损伤出现在___________期（填字母）时，CDK1形成的复合物滞留在细胞质中，不能进入细胞核内发挥作用，阻止细胞进入下一时期，可以推测检查点最可能是图甲中的___________（填数字）。
（4）胸苷（TdR）双阻断法可使细胞周期同步化，若G1、S、G2、M期依次为10h、7h、3h、1h，经常一次阻断，S期细胞立刻被抑制，其余细胞最终停留在G1/S交界处；洗去TdR可恢复正常的细胞周期，若要是所有细胞均停留在G1/S交界处，第二次阻断应该在第一次洗去TdR之后___________h到___________h进行。
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【题目】某实验小组为了探究细胞膜的通透性，将小鼠肝细胞在体外培养一段时间后，检测培养液中的氨基酸、葡萄糖和尿素（CH4N2O）含量，发现它们的含量发生了明显得变化（如图）。请回答问题：
（1）由图可知，随培养时间延长，培养液中葡萄糖和氨基酸含量__________，尿素含量__________。由于在原培养液中没有尿素，推测其是细胞中____________（填“氨基酸”或“葡萄糖”）的代谢废物。
（2）培养液中的氨基酸进入细胞后，其主要作用是____________________；被吸收的葡萄糖主要通过_________________________作用，为细胞提供____________。
（3）转氨酶是肝细胞内参与氨基酸分解与合成的一类酶，正常情况下这类酶不会排出胞外，若在细胞培养液中检测到该类酶，可能的原因是________________________________________________。
（4）葡萄糖不能通过人工合成的脂双层，说明细胞吸收葡萄糖的方式是_________________。
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【题目】下图为某地东亚飞蝗种群数量变化示意图，下列叙述错误的是：（ ）
A. 为有效防治蝗灾，应在a点之前及时控制种群密度
B. a～b段，该种群的增长率与种群密度之间呈正相关
C. 利用性引诱剂诱杀雄虫改变性别比例可防止c点出现
D. 在d～e段，该种群的增长率不变
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【题目】利用所学生生态学知识分析进行下图乙果园可作为一个生态系统进行管理请据图回答：
（1）图甲表示某生态系统组成成分间的关系，甲图最可能是该生态系统________（物质循环、能量流动、信息传递、食物网）图，其中表示生产者的是____（填图中字母），如果图中A、D之间的箭头方向是由D指向A，则D可表示_______。
（2）利用生物防治方法可控制果园害虫种群密度，如用信息素（E）-2-壬烯醇诱捕害虫丽金龟，可破坏其种群_______________________。
（3）科研人员对板栗园内的栗瘿蜂和长尾小蜂的数量进行了连续5年的检测，结果如图乙。据此判断这两个物种的种间关系是____________________。
（4）每年输入果树的能量，一部分被初级消费者摄入，一部分储存于果树的营养器官中，其余能量的去处是_________________、__________________________。
（5）如果不对果园土壤进行管理，果树林下将会出现从一年生草本植物为优势，到多年生草本植物为优势，再到草本与灌木混生等阶段的演替。在草本与灌木混生阶段，果园内很少有一年生草本植物生长，其原因是______________。
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【题目】一条由39个氨基酸形成的环状多肽，其中有4个谷氨酸（R基为一CH2一CH2一COOH），这些氨基酸的平均相对分子质量是110，则该多肽（ ）
A. 有38个肽键 B. 至少含有46个氧原子
C. 至少有5个游离羧基 D. 相对分子质量是3588
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【题目】下图示意老鼠恐惧反射建立的过程，其中分析正确的是（ ）
A. 图甲中的声音属于无关刺激 B. 图乙中电击属于条件刺激
C. 图丙中的声音属于非条件刺激 D. 条件反射一旦形成，不易消退
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