4．某同学在进行菊花茎尖组织培养时，发现组织材料只分裂而不分化出芽和根，最可能原因是(　 　)

A．未进行光照　　 　　　　　　　　　　　　　　　 B．培养基中没有加入蔗糖

C．培养基营养过多　 　　　　　　　　 D．细胞分裂素和生长素配比不对

3．(2010年上海模拟)有关平板划线操作正确的是　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　(　　 )

A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌

B．打开含菌种的试管需要通过火焰灭菌，取出菌种后要马上塞上棉塞

C．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可

D．最后将平板倒置，放入恒温箱中培养

2．利用农作物秸秆等纤维质原料生产的乙醇，经加工可制成燃料乙醇。使用燃料乙醇减少了对石油资源的依赖．下图为生产燃料乙醇的简要流程，据图分析错误的一项是　　　　　　　　　　　　　　　 (　　 )

A．要得到微生物A，最好选择富含纤维素的土壤采集土样

B．图中②过程常用的微生物B是酵母菌

C．微生物A和微生物B可利用的碳源相同

D．可用固定化酶代替微生物A起作用

1．下列有关生物技术的叙述正确的是(多选)　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 (　　 )

A．制作果醋时，必需向发酵装置不断地补充氧气，以保证醋酸菌的生长

B．制作泡菜时，罐口封闭要严，否则氧气会抑制乳酸菌的生长繁殖

C．固定化酵母细胞分解葡萄糖速度要比酵母细胞快

　　 D．培养基中添加的蔗糖是植物组织重要的能源物质

3．生物材料中分离获得某种特定成分的方法。

[知识交汇]

考点一：微生物的实验室培养要点解读

(1)培养基的主要种类

(2)培养基的营养成分

提示：培养基的营养要素除了碳源、氮源和生长因子外，还有水、无机盐以及不同微生物生长对pH以及氧气的需求。

(3)消毒和灭菌的区别

(4)纯化大肠杆菌的原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。

考点二：酵母细胞的固定化

(1)实验原理：①固定化酶不溶于反应液中，易于回收，可以重复使用。②固定化酶和固定化细胞是利用物理和化学方法将酶或细胞固定于一定空间内的技术。

　　　　　　 化学结合法

物理吸附法

(2)直接使用酶、固定化酶、固定化细胞的比较

　 (3)制备固定化酵母细胞成功的关键

　加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一环，如果浓度过高，将很难形成凝胶珠，如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数量少，都会影响实验效果，同时对海藻酸钠溶化时要用小火间断加热，避免海藻酸钠发生焦糊。

考点三：五种重要物质的提取

(1)提取方法总结

(2)DNA粗提取与鉴定

　①哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，不适于作DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。

②实验过程中两次用到蒸馏水：第一次目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA，第二次目的是稀释NaCl溶液。

③鉴定DNA加入二苯胺试剂并沸水浴加热，观察是否出现蓝色。

　 (3)血红蛋白的提取和分离操作程序

①样品处理：红细胞的洗涤(除去血浆蛋白等杂质)、血红蛋白的释放(使红细胞胞破裂，血红蛋白释放出来)、分离血红蛋白溶液(经过离心使血红蛋白和其他杂质分离开来)。

②粗分离--透析：除去样品中分子量较小的杂质。

③纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。

④纯度鉴定：一般用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，来测定蛋白质的分子量。

(4)植物有效成分的提取方法

①蒸馏法：芳香油具有挥发性，把含有芳香油的花、叶等放入水中加热，水蒸气能将挥发性较强的芳香油携带出来，形成油水混合物；冷却后，油水混合物又会重新分成油层和水层，除去水层便得到芳香油。

②萃取法：需将植物材料浸泡在乙醚、石油醚等低沸点的有机溶剂中，使芳香油或色素充分溶解，然后蒸去低沸点的溶剂，剩下的就是芳香油或色素。

③压榨法：橘子、柠檬、甜橙等植物的果皮中，芳香油的含量较多，可以用机械压力直接榨出，这种提取方法叫做压榨法。

[典例导析]

[例1](2009年安徽卷)下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是(　　 )

A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白膝培养基，经高温、高压灭菌后倒平板

B．取10⁴、10⁵、10⁶倍的土壤稀释液和无菌水各0.1ml，分别涂布于各组平板上

C．将实验组和对照组平板倒置，37^℃恒温培养24~48小时

D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数

[答案]D

[分析]本题主要考查微生物的应用与培养的有关知识。土壤中微生物的量相对稳定，由于实验原因，很容易引起数量的剧烈变化，所以要选择30~300左右进行计数。

[例2](2009年宁夏卷)

(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑______、______和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、______、______等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。

(2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行________(消毒、灭菌)；操作者的双手需要进行清洗和______；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能__________。

　 (3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_______。

　 (4)通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的____________。

　 (5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_________。

　 (6)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_______处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。

[答案](1)温度　 酸碱度　 易培养　 生活周期短　 (2)灭菌　 消毒　 损伤DNA的结构　 (3)比例合适　 (4)鉴定(或分类)　 (5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生　 (6)灭菌

[分析]本题主要考查微生物培养的综合知识。消毒一般只是消灭体表的微生物，而灭菌是杀死所有的微生物及孢子等。观察细菌等微生物的有无通常是通过培养来观察菌落的形状、颜色等。

[备战策略]

本专题知识与生活密切相关，对有关知识的考查上注重与之相关的基础知识，并突出重点。因此在复习中不要“深挖洞”，但要“广积粮”。 要牢固掌握相关的基础知识，在此基础上注重培养获取信息的能力、综合运用知识的能力。

[专题演练]

2．固定化酶和固定化细胞在生产生活中的应用。

1．微生物培养和分离的原理和技术。

2．命题形式：由于不同地区的考纳要求不同，所以山东、宁夏、广东和海南都是以选做简答题的形式出现，江苏、安徽则是选择题和简答题都有出现。

由此对2010年高考的命题趋势预测如下：

1．主要考点：微生物的分离和培养技术；酶在食品制造和洗涤方面的应用；果酒、果醋的制作方法与应用及腐乳的制作；花药离体培养技术的操作及与植物组织培养的区别；生物材料中某些特定成分的提取和蛋白质的分离。

6.某校校运会期间，来自甲、乙两个班级共计6名学生志愿者随机平均分配到后勤组、保洁组、检录组，并且后勤组至少有一名甲班志愿者的概率为

(1)求6名志愿者中来自甲、乙两个班级的学生各有几人

(2)设在后勤组的甲班志愿者的人数为,求随机变量的概率分布列及数学期望